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4）自噬体与溶酶体融合形成autolysosome，期间自噬体的内膜被溶酶体酶降解，2者的内容物合为一体，自噬体中的"货物"也被降解，产物（氨基酸、脂肪酸等）被输送到胞浆中，供细胞重新利用，而残渣或被排出细胞外或滞留在胞浆中。2、在荧光显微镜下采用GFP-LC3融合蛋白来示踪自噬形成。自噬形成时，胞浆型LC3（即LC3-I）会酶解掉一小段... 阅498 转2 评0 公众公开 21-11-30 06:40 |
2. 氯喹：氯喹（Chloroquine）作为溶酶体的抑制剂，可以抑制自噬体与溶酶体的融合从而可以用来作为自噬以及自噬流的抑制剂用于实验研究，推荐使用浓度：10umol-50umol。(2)细胞密度达到60%-70%时,弃去培养液,小心用PBS洗1遍,分别用含TG浓度为0、0.5、1 nM的培养基及含Rapamycin (终浓度1 pM)的培养基继续培养24 h;(2)每孔加入2ml含MDC(终浓度... 阅322 转1 评0 公众公开 21-07-28 13:09 |
检测LC3-I和LC3-II使用LC3A，LC3B或者LC3A/B的抗体均可。哺乳动物LC3蛋白的四个亚型（LC3A, LC3B,LC3B2和 LC3C），他们的表达因组织或细胞类型而异。目前的LC3抗体所检测的抗原表位都位于LC3的N端，由于PE基团结合可能导致N端区域的构象变化，使得抗体对LC3-II的亲和性更高，所以LC3-II条带显色深并不能代表该样本处于高自噬状态。LC3-I的分子... 阅5125 转17 评1 公众公开 20-12-13 10:36 |
基金知识##细胞自噬的相关实验和方法，对实验很有用。②Rapamycin:用MEM培养基配成终浓度为1 umol/L,现用现配;2. 氯喹：氯喹（Chloroquine）作为溶酶体的抑制剂，可以抑制自噬体与溶酶体的融合从而可以用来作为自噬以及自噬流的抑制剂用于实验研究，推荐使用浓度：10umol-50umol。(2)细胞密度达到60%-70%时,弃去培养液,小心用PBS洗1遍,分别用... 阅1086 转12 评0 公众公开 19-05-05 15:50 |
2. 细胞自噬与风湿性疾病：Autophagy: controlling cell fate in rheumatic diseases.Nat Rev Rheumatol. 2016 Sep;12(9):517-31.Intersections between Autophagy and Disease-Associated Genes4. 自噬起始和终止的分子机制：Emerging Mechanisms in Initiating and Terminating Autophagy.Trends Biochem Sci. 2017 Jan;42(1):28-41.Crosstal... 阅1 转自石头6feix... 公众公开 18-12-23 16:55 |
自噬的调控1、依赖mTOR（哺乳动物雷帕霉素靶点）途径的自噬 1）PI3K-AKT-mTOR信号通路 2）AMPK-TSC1/2-mTOR 信号通路2、其它的信号通路1）3-甲基腺嘌呤（3-MA）通过抑制Class ⅢPI3K的活性抑制自噬。T细胞的激活与TCR信号通路和CD28信号通路有关，TCR信号通路和CD28信号通路的激活能促进IL-2的转录表达，IL-2与其受体结合，激活自噬相关通... 阅1 转自医学院的... 公众公开 18-12-23 16:02 |
B图通过荧光素酶分析显示，转染miR-378与转染抗miR-378者对荧光素酶的表达均有影响，即从机制的水平说明miR-378与PDK1可直接相互作用；I图通过Control,Ad-378,PDK1,Ad-378+PDK1四组进行WB进行检测，Control，Ad-378相比p-AKt,p-mTOR，p-ULK1表达降低，说明miR-378可通过mTOR/ULK1通路促进自噬，PDK1,p-FoxO,p62表达减弱，LC3B II表达增强，FoxO... 阅37 转1 评0 公众公开 18-12-14 23:36 |
*GFP-LC3单荧光指示体系：利用了LC3在自噬形成时聚集的原理，即无自噬时，GFP-LC3 融合蛋白弥散在胞浆中；*mRFP-GFP-LC3双荧光自噬指示体系：用于标记追踪LC3以及自噬流的变化。在自噬（Autophagy）形成过程中，胞浆中的微管相关蛋白轻链3（MAP-LC3）会酶解掉一小段多肽形成LC3-I，LC3-I跟磷脂酰乙醇胺即脑磷脂(PE)结合转变为（自噬体）膜型（... 阅35 转0 评0 公众公开 18-12-13 09:59 |
自噬表型研究中，我们倡导的“自噬研究的金指标”----包括LC3剪切的变化、电镜直接观察到自噬囊泡、荧光蛋白标记的LC3监测自噬流。荧光蛋白标记的LC3监测自噬流，即用汉恒生物的mRFP-GFP-LC3融合蛋白的腺病毒，感染细胞。mRFP 用于标记及追踪LC3，GFP 的减弱可指示溶酶体与自噬小体的融合形成自噬溶酶体，即由于GFP 荧光蛋白对酸性敏感，当自噬... 阅463 转5 评0 公众公开 18-12-12 11:37 |
