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这样产生的病毒的基因组被偷梁换柱，只能把我们需要的部分整合到目的靶细胞的基因组中去，还能完美的实现表达，最关键的一点包出来的病毒还是复制缺陷的，因为他的基因组没有他复制需要的结构基因和调节基因，这也是为啥我们包装的病毒是复制缺陷型的病毒。最后慢病毒包装只需要把两个辅助质粒和穿梭质粒共同转染到293T细胞中，三个质粒分别表... 阅260 转2 评0 公众公开 22-12-24 16:19 |
实验小站|细胞转染操作方法及各方法比较。影响转染效率的因素很多，从细胞类型、细胞培养条件和细胞生长状态，到转染方法的操作细节，都需要考虑。另一种解释是通过细胞是内吞作用而被进入细胞。特点：可用于难转染的细胞、原代细胞，体内细胞等，但携带基因不能太大（<8kb），细胞需处分裂期，需考虑安全因素；大的基因组（>65kb）但细... 阅213 转1 评0 公众公开 22-05-29 16:52 |
基因干扰体内实验方法详解之前有讲到基因干扰的体外实验常用到的几种方法和他们的特点，而体内实验和体外实验还是有些差别的。siRNA的形式应用于体内实验siRNA的形式应用于体内实验还需要进行相应的化学修饰，因为siRNA本身是属于RNA，也具有RNA不稳定、易降解的特点，所以对siRNA进行相应的化学修饰可以提高其稳定性和半衰期，从而更好的发挥... 阅28 转0 评0 公众公开 21-10-08 13:52 |
前面我们谈到了来自基因组暗物质神秘的非编码长链RNA（lncRNA）、非编码环形RNA（ciRNA）、微小的RNA（miRNA），现在我们再来谈谈与微小的RNA（miRNA）有密切关系的小干扰RNA（siRNA）和短发夹RNA（shRNA）。siRNA表达框架(siRNA expression cassettes，SECS)是一种由PCR得到的siRNA表达模版，包括一个RNA pol III启动子，一段发夹结构siRNA，... 阅155 转2 评0 公众公开 21-10-08 11:36 |
siRNA不仅能引导RISC切割同源单链mRNA，而且可作为引物与靶RNA结合并在RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase，RdRP)作用下合成更多新的dsRNA，新合成的dsRNA再由Dicer切割产生大量的次级siRNA，经过若干次的合成-切割循环，RNAi的作用不断放大，最终将靶mRNA完全降解。shRNA质粒是以质粒的形式通过转染试剂或者电转将质粒转染细胞，质粒进入... 阅76 转0 评0 公众公开 21-10-08 10:43 |
你的siRNA为什么没有效果？要保证RNA干扰的效果就必须保证siRNA能够成功的转染到细胞中去，那有时候会转染不进去，原因可能有如下几点：1、转染方法：转染siRNA浓度太低。3、细胞原因：a、转染效率跟细胞状态、细胞代数、细胞密度等有关，一般低的细胞代数（<50）能确保基因型不变。下图是转染FAM标记的siRNA后的前列腺癌细胞所拍的图片，转... 阅190 转2 评0 公众公开 21-09-14 09:32 |
前面我们谈到了来自基因组暗物质神秘的非编码长链RNA（lncRNA）、非编码环形RNA（ciRNA）、微小的RNA（miRNA），现在我们再来谈谈与微小的RNA（miRNA）有密切关系的小干扰RNA（siRNA）和短发夹RNA（shRNA）。siRNA表达框架(siRNA expression cassettes，SECS)是一种由PCR得到的siRNA表达模版，包括一个RNA pol III启动子，一段发夹结构siRNA，... 阅38 转1 评0 公众公开 21-09-13 13:17 |
严紧型质粒：当细菌染色体复制一次时，质粒也复制一次，每个细菌内只含1～2个质粒；那么到这里你可能会问，高拷贝质粒我们可以多提一点质粒，低拷贝数的质粒有什么作用呢？在质粒转移过程中，供体菌和受体菌通过结合作用紧密接触，质粒从供体细胞向受体转移，同时进行质粒复制。这时，可以在 google scholar 中输入质粒名称，可以直观地看哪些... 阅149 转1 评0 公众公开 21-09-06 11:51 |
基因干扰体内实验方法详解之前有讲到基因干扰的体外实验常用到的几种方法和他们的特点，而体内实验和体外实验还是有些差别的。siRNA的形式应用于体内实验siRNA的形式应用于体内实验还需要进行相应的化学修饰，因为siRNA本身是属于RNA，也具有RNA不稳定、易降解的特点，所以对siRNA进行相应的化学修饰可以提高其稳定性和半衰期，从而更好的发挥... 阅15 转0 评0 公众公开 21-09-06 11:33 |
要保证RNA干扰的效果就必须保证siRNA能够成功的转染到细胞中去，那有时候会转染不进去，原因可能有如下几点：1、转染方法：转染siRNA浓度太低。siRNA所加的量及其浓度可以根据实验自己调整，按照要求配成20uM的浓度，那1ul就是20pmol,在1ml细胞培养液中加1ul,那终浓度就是20nM,加2ul就是40nM，以此类推。3、细胞原因：a、转染效率跟细胞状态、... 阅412 转0 评0 公众公开 21-08-02 20:06 |
