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高通量技术在sumo化修饰蛋白组学研究中的应用与突破。高通量技术的发展为SUMO化修饰蛋白组学研究提供了强大的工具,本文将重点介绍高通量技术在SUMO化修饰蛋白组学研究中的应用与突破。通过质谱技术可以鉴定SUMO化修饰蛋白及其修饰位点,进而推断SUMO化修饰对蛋白功能的调控。(2)蛋白质芯片技术:蛋白质芯片技术能够高通量地筛选和鉴定SUMO化...
为了验证MORC2是否在这两个位点被SUMO化,作者分别将K767和K827突变为不可SUMO化的残基精氨酸(R),然后将野生型(WT)、K767R或K827R突变体Flag-MORC2与GFP-SUMO1、GFP-SUMO2或GFP-SUMO3瞬时转染到HEK293T细胞中。TRIM28作为SUMO E3连接酶参与MORC2 SUMO修饰。虽然在HEK293T细胞中Flag-MORC2与内源性CBX4相关,但Flag-CBX4的异位表达并未显著影响...
【分享篇】用体外手段分析蛋白SUMO化修饰位点。哺乳动物细胞中比较常见的三种SUMO化修饰类型:SUMO1、SUMO2和SUMO3,其中SUMO2和SUMO3有96%的同源性,而SUMO1和其他两种修饰只有45%的序列同源性。此体外SUMO化检测手段可应用于任何标记蛋白和任何SUMO1,SUMO2或者SUMO3的突变体蛋白,无论它们是单独使用还是一起使用,都可以确定所给的待检产物...
为确定预测的A蛋白的SUMO化位点是否为其修饰位点,分别构建Flag-A蛋白 Kaa1R、Flag-A蛋白 Kaa2R、Flag-A蛋白 2K/2R质粒(将2个赖氨酸位点单独或同时突变为精氨酸位点),在cell-2细胞中分别转染了 Flag-A蛋白或其突变体,以及Myc-SUMO-1。首先,我们利用Flag-A蛋白及3个SUMO化位点突变体的质粒,将GAL4-DBD片段插入到上述载体中,构建了 GAL4-DBD-...
在哺乳动物细胞中,SUMO蛋白家族由SUMO1-4 4个成员组成,SUMO2与SUMO3具有95%的同源性,但它们与SUMO1大约只有45%的同源性。SUMO化修饰过程由4个连续的酶促反应组成[1]:SENP酶促使SUMO成熟化、E1酶激活SUMO、活化的SUMO与E2酶结合、E3酶促进SUMO与底物的结合(图1)。目前已知有6种SENPs,包括SENP1/2/3/5/6/7,SENP1/2主要解离SUMO1-3,SENP3/...
Molecular Cell | 程金科组发现激活Sirt3和调控线粒体代谢的关键信号通路。Sirt3是线粒体中的一个重要的去乙酰化修饰酶,能够调控线粒体中许多代谢酶的活性,进而调控细胞线粒体的代谢。2019年7月10日,上海交通大学医学院程金科实验室在Molecular Cell杂志上发表了题为SENP1-Sirt3 Signaling Controls Mitochondrial Protein Acetylation and ...
作者调查了33个SUMO修饰调控基因在肺腺癌中的作用,即SUMO异构体(SUMO1,SUMO2,SUMO3,SUMO4),SUMO活化酶(SAE1,UBA2),SUMO结合酶(UBE2I),SUMO E3连接酶(BCL11A,CAPN3,CBX4,HDAC4,HDAC7,MUL1,NSMCE2,PIAS1,PIAS2,PIAS3,PIAS4,RANBP2,RANGAP1,RNF212,RWDD3,TOPORS,TRIM27,TRIM28,ZMIZ1),SUMO蛋白酶(HINT1,SENP...
SUMO (small ubiquitin-like modifier)标签蛋白是一种小分子泛素样修饰蛋白,研究发现SUMO可以作为重组蛋白表达的融合标签和分子伴侣,不但可以进一步提高融合蛋白的表达量,且具有抗蛋白酶水解以及促进靶蛋白正确折叠,提高重组蛋白可溶性等功能。目前研究发现真核细胞中有多种SUMO蛋白, SUMO化主要修饰蛋白质的赖氨酸残基,SUMO化修饰是一...
在这29个基因中,通过使用发现的TCGA队列进行单变量Cox回归分析,发现有七个基因(AURKB、BIRC5、CDCA8、CDH1、NR1H3、PPARA和TOP2A)与肾癌的预后相关。这些发现在其他四个队列(验证TCGA队列、总TCGA队列、CPTAC队列和E-MTAB-1980队列)中得到了验证(图1B-E;在作者的研究中,作者检查了肾癌组织中SUMOylation基因的RNA表达状态,并利用三个...
作者使用上述公式计算了TCGA队列中每个患者的风险评分。作者注意到,随着风险评分的增加,BCR患者的比例也增加(图2E),高风险组的BCR无进展生存率比低风险组在整个TCGA训练队列(图2F)、TCGA测试队列(图2G)和整个TCGA-PRAD队列(图2H)中都要差。尽管在GSE46602队列中缺乏统计学意义,但作者注意到高风险组的患者无论是在GSE70770队列(图...
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