凝血酶原时间（PT）测定意义

凝血酶原时间（PT）测定和胆碱酯酶（ChE）活力检测各有什么临床意义？
凝血酶原是由肝脏合成的一种蛋白质。凝血酶原试验是一种了解血液凝固情况的试验，它可以反映肝脏的凝血功能。凝血酶原时间（PT）和凝血因子Ⅰ、Ⅴ、Ⅶ和Ⅹ有关，而这些因子也均在肝脏合成。凝血酶原时间的正常值为11～15秒（奎氏法）。当肝脏出现病变、肝功能不良、上述凝血因子因合成障碍而含量降低时，即可引起凝血酶原时间延长而发生凝血障碍。如重型肝炎时，凝血酶原时间明显延长，患者容易出血，预后较差；慢性活动性肝炎与肝硬变时，凝血酶原时间可轻度延长；肝外阻塞而无明显肝细胞损害时，凝血酶原时间可正常。长期肝外阻塞、胆汁淤积、影响维生素K的吸收时，也可导致凝血酶原时间延长；若给患者注射维生素K时，则凝血酶原时间可恢复正常。
此外, 由于凝血酶原半衰期短，在急性重型肝炎发病后的短时间内即有凝血酶原时间的改变，故测定凝血酶原时间，对重型肝炎的诊断，病情和预后的判定，具有重要的临床意义。
血清胆碱酯酶，又称“假性”或“非特异性”胆碱酯酶，是由肝脏合成的一种特异性较差的，既可作用于乙酰胆碱，又能作用于其他胆碱酯类的酶。其正常值为0.80～1.00或40单位以上。
由于血清胆碱酯酶的半衰期短，所以它是肝内损害时的一种极为敏感的、反映肝脏酶合成障碍的试验。其活性降低的程度往往与肝病的严重程度相一致。如重型肝炎患者胆碱酯酶活性值一般都较正常降低，且降低程度与病情轻重密切相关；约80％的病人，其血清胆碱酯酶活性可降至正常值的60％，重危病人甚至下降至10％以下，此类患者多很快死亡。因此，血清胆碱酯酶活性的测定，有助于对重型肝炎的诊断及对病情和预后的判定。此外，重度慢性肝炎和晚期肝硬变患者，血清胆碱酯酶亦有不同程度的降低。
血栓与止血实验室检查的临床重要性与日俱增，检验内容不断扩大，工作量也日益增多；不断出现的方法更新和试剂商品化、操作自动化，改变了以往靠手工操作、自配试剂、工作效率低的局面。与此同时，方法标准化和质量控制也显得格外重要。然而，由于血栓与止血试验的特殊性 ......
有关（凝血酶原时间（PT）、活化的部分凝血活酶时间（APTT）和纤维蛋白原(FIB)测定等三项实验）
摘要：对ICSH、ICTH或美国国家临床生物化学委员会（NCCLS）等国际以文件形式公布的有关凝血酶原时间（PT）、活化的部分凝血活酶时间（APTT）和纤维蛋白原测定等三项实验的标准化及其重要性作了简单叙述。
关键词： 凝血酶原时间 活化的部分凝血活酶时间 纤维蛋白原 标准化
由于血栓与止血实验的特殊性，因此迄今仅有凝血酶原时间（prothrombin time,PT）、活化的部分凝血酶时间（activated partial thromboplastin time,APTT）和纤维蛋白原（fibrinogen,Fg）等三项实验有了标准化的试剂（如PT）、标准品（如Fg）、质控品和统一的报告形式等；其他，如血小板功能、抗凝因子和纤溶成分等检测尚缺乏成熟的标准化方案。本文仅就经国际血液学标准化委员会（ICSH）国际血栓与止血委员会（ICTH）或美国国家临床生物化学标准委员会（NCCLS）等国际组织以文件形式公布的有关PT、APTT和Fg三项实验的标准化问题作一简介。
一、标准化和质量控制的重要性
所谓血栓与止血检测方法的标准化和质量控制，是指采用统计学原理，运用规范的物理、化学、生物学的方法，对血栓与止血实验的技术、操作、仪器、试剂和标本等项的质量水平，进行合理的管理、检测和评价，以标准化和质量控制来堵绝误差，提高实验的精密度、准确性和可靠性。标准化和质量控制的重要性在于：
1、为临床诊治提供可靠的依据：实验结果的可靠性是临床诊治疾病的重要依据和条件。实验结果若为假阳性就会造成误诊、误治；若为假阴性就会造成漏诊、漏治；实验结果偏高或偏低都会影响患者的诊断、鉴别诊断以及影响医师对病情和疗效的判断。
2、提高血栓与止血基础研究的效率和价值：血栓与止血基础研究的形式就是进行各种实验。实验可靠性好，就能揭示血栓与止血的客观规律，甚至可带来重大理论突破及（或）社会、经济效益；若实验可靠性差或有错误，则会造成假象或错误理论。
3、有助于人群健康调查和建立血液学参数的正常范围：为了解一定人群的健康水平，建立具有广泛意义的血液学参考值的范围须进行较大规模人群的健康调查，健康调查必须要有实验结果的可靠性作保障，不然会导致不准确或错误的结果，故质量控制对群体医学也有重要意义。
总之，血栓与止血实验室的质量控制，从一定程度上反映一个国家，一个地区，一个单位血栓与止血医疗水平和研究水平的高低。因此，应倍加重视。
二、 凝血酶原时间（PT）的标准化
自1935年Quick创建凝血酶原时间（prothrombin time,PT）测定方法以来，迄今仍然 是检查外源凝血系统诸因子及相关抑制物的重要筛选试验，PT也是目前口服抗凝剂治疗的主要手段。但是，PT测定受多种因素影响，必须对它进行标准化和质量控制，以提高PT检测的精密度、准确度和可靠性。 
（一）凝血酶原时间（PT）的标准化问题
1、组织凝血活酶标准化：应用的国际参考品（international reference preparation IRP），有下列几种：
（1）单一组织凝血活酶国际参考品：是一种组织提取物的生理盐水悬液制剂。WHO在英国使用的统一标准的"英国比较凝血活酶"（British comparative thromboplastin,BCT）为基础，制备WHO的原级凝血活酶参考品（primary reference preparation），如人脑组织凝血活酶，编号67/40。同时又以BCT67/40为基础标化了次级参考品（secondary reference preparation）。如牛脑组织凝血活酶，编号为68/434；兔脑为70/178。后来WHO还公布了一些次级组织凝血活酶参考品，如人脑或胎盘制剂，如BCT/253；兔或兔、猴组织混合制剂，如RBT/79等。
（2）复合组织凝血活酶国际参考品：它是组织提取物的生理盐水悬液中加入适量的纤维蛋白原、因子V 和氯化钙组成的制剂，如牛组织凝血活酶OBT/79等。
目前世界各国都广泛应用WHO的这些参考品来校正本国或本地区制备或生产的组织凝血活酶参考物。这样使世界范围内有了多种组织凝血活酶参考品。
2、组织凝血活酶工作制剂（working preparation,WP）的国际敏感度指数（international sensitivity index,ISI）
由于不同组织凝血活酶对凝血因子的敏感性不同。为了使不同敏感性的组织凝血活酶在检测PT中能得到同样的结果，必须要制定一个共同的敏感性指标。这就需要通过自制的试剂与国际参考品（IRP）进行比较，然后得出一个校正值。具体的方法如下：（略）
3、PT测定结果的报告方式：理论上，无论何种组织凝血活酶，只要标有ISI，就可与国际参考制品进行对比校正，并可用同一种计量单位报告。1985年ICSH和ICTH推荐以PT监测口服抗凝剂的报告方式是国际正常化比率（international normalizde ratio,INR）。
INR的计算公式如下： 在用INR后，各种敏感性不同的组织凝血活酶均可得到相同的INR值。
（略）
（二）凝血酶原时间（PT）的推荐方法
[原理]
将组织凝血活酶（主要含组织因子和脂质）和钙离子，加到枸橼酸抗凝血浆中，在37℃保温，测定血浆凝固时间，即为PT。PT主要用于筛选检测外源凝血系统的因子Ⅶ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅹ和相关因子的抑制物的试验。
[标本来集和处理]
1、标本采集：用硅化或塑料注射器抽取空腹静脉血，按9:1比例加入含0.109mol/L的枸橼酸钠抗凝剂的硅化或塑料试管中，轻轻混合均匀。
2、标本处理：以2000～2500g，离心15分钟，分离乏血小板血浆，并在24小时内完成试验。
3、正常对照血浆：选择正常健康男性和女性各lO名以上，年龄在18～45岁。但不能是妊娠、月经期、哺乳期和口服避孕药的妇女，采取的血浆冰冻干燥保存或-80℃保存。
[试剂]
1、抗凝剂：109mmol/L枸橼酸钠液（相当于含二分子结晶水的枸橼酸钠32g/L）。
2、凝血活酶试剂：市售商品，应标有ISI、批号及有效期。冻干者应按说明书加指定的缓冲稀释剂复溶。
3、氯化钙（CaCl2）溶液：为25mmol/L。（目前有些商品试剂已将凝血活酶液与氯化钙液混合好，可不必另配CaCl2液）。
4、质控物：正常及异常对照血浆
5、配制试剂用水必须符合1级纯水的标准。
[仪器]
1、手工法：秒表，保持37℃±1℃的恒温水浴箱或电热块。水深能浸试管3cm以上，表面无划痕的10×mm拭管。经标准的0.1mL移液管。经校正的秒表。
2、仪器法：各种自动或半自动血凝仪，严格按说明书操作。
[操作步骤]
1、手工法
（1）测定温度36.5～38.5℃，上述各试剂及被测血浆，均应预温至此一温度，但凝血活酶试剂预温不可超过30分钟，血浆预温一般不宜超过10分钟。
（2）所用试管及加样器等接触血浆的器具均为塑料或硅化玻璃管。
（3）吸取枸橼酸抗凝血浆0.1mL，加入一小试管中：加入凝血活酶试剂0.1mL混匀后置37℃水浴中。再加入25mmol/L CaCl2液0.1mL，（也可先将凝血活酶试剂与CaCl2溶液等量混合，加入0.2mL）。立即混匀并开动秒表：试管仍浸于水浴中，至约10秒钟时，自水浴中取出，在纱布上迅速擦去试管外水滴，在明亮处不断倾斜试管，在流动状态下观察有无纤维蛋白形成。一旦见到纤维蛋白（同时将出现液体流动减慢），立即停表，记录时间。每次测定二管，按平均数报告。本试验的最后混合液其pH应为7.2～7.3，大部分商品凝血活酶试剂均用含缓冲液的溶液配制。
（4）每批均同时做正常和异常对照，方法应与测定标本完全相同。
[报告方式]
1、以PT的秒（S）数报告（最接近的0.5秒）
2、以患者血浆（S）/正常对照PT（S）的比率（PRT）报告。
3、在口服华法令类抗凝药物治疗监控时，应报告国际正常化比率（INR）。（略）
三、活化部分凝血活酶时间(APTT)的标准化
（一）活化部分凝血活酶时间(APTT)的标准化
APTT是检测内源凝血系统诸凝血因子缺陷和相关抑制物的筛选试验，也是当前用于凝血因子、肝素抗凝治疗以及狼疮抗凝物质检测的主要手段。
与PT测定一样，不同的部分凝血活酶、不同的活化剂和不同的激活时间对各种凝血因子缺陷、对肝素和对狼疮抗凝物质的敏感性相差很大。例如，检测APTT的试剂中，所用活化剂（白陶土、硅藻土、鞣花酸）不同，他们对检测肝素、狼疮抗凝物质和因子Ⅷ、Ⅸ的敏感性不同。
迄今，ICSH和ICTH尚未有APTT检测方法标准化或试剂标准化的可行方案问世，仅NCCLS于1992年，提出一个编号为H29-T的暂行方案。
（二）活化的部分凝血活酶时间（APTT）的推荐方法  (略）http://zhidao.baidu.com/question/6788949.html