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茶 游离氨基酸总量测定 Tea—Determination of free amino acids content GB/T8314—2002代替GB/T8314—1987 1 范围 本标准规定了对茶叶中游离氨基酸总量测定的原理、仪器和用具、试剂和溶液、操作方法及结果计算方法。 本标准适用于茶叶中游离氨基酸总量的测定。 2 引用标准 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。 GB/T8302—2002 茶 取样 GB/T8303—2002 茶 磨碎试样的制备及其干物质含量测定 GB/T8312—2002 茶 咖啡碱测定 GB/T8313—2002 茶 茶多酚测定 3 定义 本标准采用下列定义。 游离氨基酸 free amino acids 茶叶水浸出物中呈游离状态存在的具有α-氨基的有机酸。 4 原理 α-氨基酸在PH8.0的条件下与茚三酮共热，形成紫色络合物，用分光光度法在特定的波长下测定其含量。 5 仪器和用具 实验室常规仪器及下列各项； 5．1 分析天平：感量0.001g. 5．2 分光光度仪。 6 试剂和溶液 所用试剂应为分析纯（AR），水为蒸馏水。 6．1 PH8.0磷酸盐缓冲液：按GB/T8313—2002中6.2的规定，配制1/15mol/L磷酸氢二钠(6.2.1)和1/15mol/L磷酸二氢钾(6.2.2)溶液。然后取1/15mol/L磷酸氢二钠溶液95mL和1/15mol/L磷酸二氢钾溶液5mL，混匀。 6．2 2%茚三酮溶液，称取水合茚三酮（纯度不低于99%）2g，加50mL水和80mg氯化亚锡(SnCl2·2H2O)搅拌均匀。分次加少量水溶解，放在暗处，静置一昼夜，过滤后加水定容至100mL。 6．3 茶氨酸或谷氨酸标准液：称取100mg茶氨酸或谷氨酸（纯度不低于99%）溶于100mL水中，作为母液。准确吸取5mL每液，加水定容至50mL作为工作液(1mL含茶氨酸或谷氨酸0.1mg)。 7 操作方法 7．1 取样 按GB/T8302的规定。 7．2 试样的制备 按照GB/T8303的规定。 7．3 测定步骤 7．3．1 试液的制备 按GB/T8312—2002中11.1的规定。 7．3．2 测定 准确吸取试液（7.3.1）1mL，注入25mL的容量瓶中，加0.5mLPH8.0磷酸盐缓冲液(6.1)和0.5mL2%茚三酮溶液（6.2），在沸水浴中加热15min。待冷却后加水定容至25mL。放置10min后，用5㎜比色杯，在570nm处，以试剂空白溶液作参比，测定吸光度（A）。 7．3．3 氨基酸标准曲线制作 分别吸取0.0、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL氨基酸工作液(6.3)于一组25mL容量瓶中，各加水4mL、PH8.0磷酸盐缓冲液(6.1)0.5mL和2%茚三酮溶液(6.2)0.5mL，在沸水浴中加热15min冷却后加水定容至25mL，按7.3.2的操作测定吸光度（A）。将测得的吸光度与对应的茶氨酸或谷氨酸浓度绘制标准曲线。 8 结果计算 8．1 计算方法 茶叶中游离氨基酸含量以干态质量分数表示，按式（1）计算： 式中：L1——试液总量，mL； L2——测定用试液量，mL； M0——试样量，g； C——根据7.3.2测定的吸光度从标准曲线上查得的茶氨酸或谷氨酸的毫克数； m——试样干物质含量，%。 如果符合重复性（8.2）的要求，则取两次测定的算术平均值作为结果，结果保留小数点后一位。 8．2 重复性 同一样品的两次测定值之差，每100g试样不得超过0.1g。 |
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