HPLC Determination of Sugars in "Tainong 6" Pineapple
【作者中文名】 刘胜辉; 魏长宾; 孙光明; 臧小平; 【作者英文名】 LIU Sheng-hui1; 2; WEI Chang-bin1; SUN Guang-ming1; ZANG Xiao-ping1; 2(1.South Subtropical Crops Research Institute; Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences; Zhanjiang 524091; China; 2.National Center of Important Tropical Crops Engineering and Technology Research; Haikou 571101; China); 【作者单位】 中国热带农业科学院南亚热带作物研究所; 国家重要热带作物工程技术研究中心; 【文献出处】 食品科学, Food Science, 编辑部邮箱 2009年 12期 期刊荣誉:中文核心期刊要目总览 ASPT来源刊 中国期刊方阵 CJFD收录刊 【关键词】 菠萝; 高效液相色谱; 糖; 【英文关键词】 HPLC; pineapple fruit; sugar; 【摘要】 采用高效液相色谱法测定台农6号菠萝果实中糖分含量的方法。以90%乙醇作为提取液,色谱柱为CHO-820(钙型)糖柱(300mm×7.8mm),柱温90℃,流动相为超纯水,流速0.5ml/min,进样体积10μl,用示差折光检测器检测菠萝果实中的糖分。本方法的相对标准偏差为0.59%~0.85%,相关系数在0.9998以上,加标回收率为98.84%~100.6%。台农6号菠萝果肉含糖量与成熟季节有关,夏季果(7月成熟)和秋季果(9月成熟)含蔗糖最高,其次为葡萄糖和果糖,冬季果葡萄糖含量最高、蔗糖含量最低。 【英文摘要】 A method using high performance liquid chromatography(HPLC) was presented for the determination of sucrose,glucose and fructose in "Tainong 6" pineapple.The sugars in pineapple was extracted with 90% ethanol,and the determina-tion was performed on CH-820(Ca) column(300 mm × 7.8 mm,column temperature 90 ℃) with ultrapure water as a mobile phase at the flow rate of 0.5 ml/min using a refractive index detector.There were good linear relationships between HPLC peak area and concentrations of the three sugars wi... ※分析检测食品科学2009,Vol.30,No.12163 葡萄糖、果糖、蔗糖均为国产分析纯;水为超纯水。 1.2仪器与设备 Series200高效液相色谱仪、Series200示差折光检测 器美国PE公司;CHO-820钙型糖柱美国Transgenomic 公司;AT-130柱温箱天津奥特赛恩斯仪器有限公司; Universal 32R高速台式冷冻离心机德国Hittich公司; Elix5超纯水仪美国Millipore公司。 1.3标准溶液的配制 准确称取果糖、葡萄糖、蔗糖各2 0 g,转移至 1000ml容量瓶中,用双蒸水定容至刻度,得到各自浓 度均为20mg/ml的混标溶液。逐级稀释至10、5、2.5、 1.25、0.625mg/ml。 1.4色谱分析条件 色谱柱为CHO-820钙型糖柱,柱温90℃,流动相 为超纯水,流速0.5ml/min,进样体积10μl。 1.5样品处理 样品处理常用方法有水提法[1]、醇提法[8],本实验 中色谱柱为离子交换树脂,对蛋白质及金属离子相当敏 感,因此用乙醇提取法,参照文献[8]的方法略有改进。 准确称取经搅拌器搅碎混匀的菠萝果肉1.00g,用4ml 90%的乙醇溶液研磨,10000r/min离心10min,残渣加 入2ml提取液再提取,合并上清液,90℃水浴蒸干,定 容至l0ml,漩涡混合后用一次性注射器抽取提取样液,经 0.45μm滤膜过滤后以备上机分析。每个样品重复3次。 2结果与分析 2.1标准曲线的制作 取各浓度标准溶液20、10、5、1.25、0.625mg/ml, 进样10μ1,以标样浓度Y(mg/ml)为纵坐标,标样峰面 积X(mV)为横坐标,绘制标准溶液曲线,计算线性回归 方程,结果见表1。 图1三种糖混合标准样品的HPLC色谱图 Fig.1 HPLC chromatogram of mixed sucrose,glucose and fructose standards 50 0 蔗糖 Vm 时间(min) 0 5 10 15 20 葡萄糖果糖 组分线性回归方程相关系数线性范围(mg/ml) 蔗糖y=3×10-6+0.0661 0.9998 0.625~20 葡萄糖y=4×10-6+0.1741 0.9999 0.625~20 果糖y=3×10-6+0.1694 0.9998 0.625~20 表1标准曲线的回归方程、相关系数和线性范围 Table 1 Regression equation,correlation coefficient and linear range for sucrose,glucose and fructose 成熟时期蔗糖(g/100g FW)葡萄糖(g/100g FW)果糖(g/100g FW) 7月4.67 4.25 3.06 9月4.39 3.87 2.77 11月1.5 3.27 2.59 表3不同季节成熟的台农6号菠萝糖分含量的差异 Table 3 Contents of sucrose,glucose and fructose in“Tainong 6”pineapple at different harvest time 对待测的菠萝果肉提取液同一样品重复进样五次, 测定峰面积,并通过计算相对标准偏差(RSD)考查其测 定的精密度,得出三种糖的RSD依次为果糖0.85%、葡 萄糖0.59%、蔗糖0.78%,说明精密度良好(表2)。 2.3回收率实验 采用加标样回收法,每个样品取2份,一份加入 蔗糖、葡萄糖、果糖的标准溶液,一份不加,平行 测定五次,计算回收率,结果见表2。实验表明,3 种糖的平均回收率分别为98.84%、100.6%、98.84%, 说明该方法具有较高的准确度。 2.4菠萝样品分析 按照1.4节色谱条件,将不同季节成熟的台农6号 菠萝样品溶液进行前处理后,进样10.0μ1进行液相色 谱分析,测定果糖、葡糖糖、蔗糖的色谱峰峰面积, 代入工作曲线分别计算其含量,结果见表3,样品色谱 图见图1。 3结论与讨论 本研究用CHO-820钙型糖柱作为分析柱,水为流动 相,柱温90℃,分析菠萝果实中的果糖、葡萄糖、蔗 糖,保留时间重现性好,三者的含量和峰面积比值之 间呈良好的线性关系,相对标准偏差为0.59%~0.85%, 加标回收率为98.84%~100.6%,是一种简便、快速、 准确的检测方法。 不同季节成熟的菠萝含糖量存在较大的差异,本研 究结果表明7月份成熟的果实蔗糖、葡萄糖、果糖含量 均高于9、11月成熟的果实;11月成熟的果实蔗糖含量 最低。 2.2精密度实验 组分样品含量(mg)加标量(mg)测得量(mg)回收率(%)RSD(%) 蔗糖45.51 40 84.52 98.84 0.85 葡萄糖35.98 40 76.47 100.6 0.59 果糖27.93 30 57.26 98.84 0.78 表2方法的精密度和回收率 Table 2 Recoveries and RSDs of precision for sucrose,glucose and fructose in sample spiked(n=5)1642009,Vol.30,No.12食品科学※分析检测 氨基柱及改性氨基柱在进行糖类分析时具有快捷省 时的优点,因而一度被认为是分离糖的较佳方法,但 无论是Luna NH2、Agilent NH2柱还是Zorbax糖分析柱 测定糖类,时间过长均容易出现拖尾、葡萄糖和果糖 分离不佳的现象,且线性范围一般在1~10mg/ml。而 CHO-820钙型糖柱是依据离子交换的原理,分离度好、 线性范围宽(0.625~20mg/ml),虽然保留时间较长,但 由于使用超纯水作为流动相,避开了剧毒溶剂乙腈的使 用,即经济又环保,且该柱可以再生,使用寿命相对 较长。虽然价格较贵,但从长远利益来说,是替代氨 基柱测糖的最佳选择。 参考文献: [1]张秀梅,杜丽清,谢江辉.高效液相色谱法测定菠萝果实中的糖分 [J].食品科学,2007,28(11):450-452. [2]SMITH L G.Optimisation of fresh-market pineapple eating quality in Queensland[J].Acta Horticulturae,1993,334:287-294. [3]何照范,张迪清.保健食品化学及其检测技术[M].北京:中国轻工业 出版社,1998:161-169. [4]张龙翔.张庭芳卜李令媛生化实脸方法技术[M].北京:高等教育出 版社,1981. [5]杨亚玲,孟冬玲,孙海林,等.固相萃取和高效液相色谱法测定水果 中的糖[J].云南化工,2003,30(2):28-30. [6]周红,杨样良,张晓显,等.半纤维素菌株发醉液中单糖及二搪的分 析[J].武汉化工学院学报,2002,24(4):17-19. [7]李云康,潘思轶.高效液相色谱法测定柑橘汁糖的组成[J].食品科 学,2006,27(4):190-192. [8]赵仁邦,刘孟军.高效液相色谱法测定枣果实中的糖分[J].食品科 学,2004,25(8):138-141. |
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