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该发酵培养基配方和发酵培养条件是： 总糖量为12％的水解糖，0.8％的玉米水解液，0.5％硫酸铵，300微克／毫升的硒酸盐或500微克／毫升的亚硒酸盐，培养基的pH为5.O，接种量为15％，在28—30℃的条件下，搅拌培养30小时。该发酵培养基配方和发酵培养条件是：总糖量l5％的糖蜜，1.0％的玉米水解液，0.5％硫酸铵，0.1％磷酸，350微克／毫升的硒酸盐或450微克／毫升的亚硒酸盐，培养基的pH为6.0，接种量为20％，在26-28℃搅拌培养24小时。该含有高生物量和高硒含量的富硒酵母的生产工艺包括四级种子液培养。该含有高生物量和高硒含量的富硒酵母的生产工艺包括随实际生产条件做适当的增加或减少工艺的变化。 主要优点如下： 1、使用的富硒酵母菌种，不仅具有高生物量，而且细胞的有机硒含量较高，其有机硒含量高达每克干细胞含500—1500微克，而现有技术生产的产品的有机硒含量为每克干细胞含有机硒500微克以下。 2、的方法使用的发酵底物为普通的麦芽汁或用淀粉水解糖或糖蜜作发酵底物，只需调节其总糖含量，添加硒酸盐或亚硒酸盐，方法简单，成本低廉。 3、的方法对发酵设备及条件没有特殊要求，一般发酵厂的设备和条件均可生产，生产投资较少。 4、的方法生产的富硒酵母产品安全无毒，投资少、见效快、效益高。 5、的方法实用性强，操作简便，易于普遍推广。 6、按的方法生产的富硒酵母产品的生物量高，酵母细胞的有机硒含量高，质量好，每克干富硒酵母细胞含有机硒达500—1500微克。 具体实施方式 实施例l 含有高生物量的富硒酵母的生产方法包括如下步骤： 1)、制备含有高生物量的富硒酵母菌种：由于自然界中没有生物量和细胞硒含量同时都高的酵母菌种，只能通过分子育种的手段才能获得含有高生物量和高硒含量的富硒酵母优良菌种。采用的方法是： ①依据不同酵母菌种的生理生化特性，在含有不同硒浓度的培养基中分别筛选生物量高的酵母菌种和抗硒能力强及细胞硒含量高的酵母菌种。 ②对生物量高的酵母菌种以及抗硒能力强及细胞硒含量高的酵母菌种进行生孢、单倍体分离，经诱变筛选具有不同交配型及不同遗传标记的单倍体突变菌株。 ③将分离到的生物量高的酵母菌单倍体突变菌株以及抗硒能力强及细胞硒含量高的酵母菌单倍体突变菌株进行杂交育种。 ④在选择培养基上筛选高生物量和高硒含量的二倍体杂交优良菌株，即富硒酵母菌种。 2)、在发酵培养基和优化的发酵培养条件上发酵培养含有高生物量和高硒含量的富硒酵母： (1)、发酵培养基配方： 选择8％一20％总糖量的麦芽汁，内含200～400微克／毫升的硒酸盐或400～600微克／毫升的亚硒酸盐，培养基的pH为4.5—7.0。 (2)、优化的发酵培养条件： 发酵生产含有高生物量和高硒含量的富硒酵母的培养条件是：富硒酵母菌种的接种量为5—30％，在25-32℃条件下，搅拌培养l6—30小时； 3)、生产含有高生物量和高硒含量的富硒酵母产品：其生产工艺包括： 斜面菌种→液体菌种→一级液体种子培养→二级液体种子培养→三级液体种子培养→发酵罐发酵培养→收集酵母细胞及干燥→粉碎及包装高生物量的高富硒含量的富硒酵母。下面对各生产工艺进一步说明如下： (1)、斜面菌种：富硒酵母菌种接种于含有总糖含量为8-20％、硒酸盐浓度为200～400微克／毫升(或用亚硒酸盐，其浓度为400～600微克／毫升)的麦芽汁固体斜面上，在25—32℃的条件下，培养24-72小时后，放入4℃冰箱保存。 (2)、液体菌种：将保存的富硒酵母菌种活化后，接一环细胞于装有l50毫升总糖含量为8—20％、硒酸盐浓度为200～400微克／毫升(或用亚硒酸盐，其浓度为400～600微克／毫升)的麦芽汁培养基的三角瓶中，于25—32℃的条件下，搅拌培养l4—20小时，即为液体菌种。 (3)、一级液体种子培养：将液体菌种按5～20％的接种量接入装有150毫升总糖含量为8—20％、硒酸盐浓度为400～600微克／毫升(或用亚硒酸盐，其浓度为400～600微克／毫升)的麦芽汁培养基的三角瓶中，在25—32℃的条件下，搅拌培养l4—20小时，即为一级液体种子培养物。 (4)、二级液体种子培养：将一级种子培养液按5～20％的接种量接入装有45升总糖含量为8—20％、硒酸盐浓度为200～400微克／毫升(或用亚硒酸盐，其浓度为400～600微克／毫升)的麦芽汁培养基的小卡氏发酵罐，在25—32℃的条件下，搅拌培养14-20小时，即为二级液体种子培养物。 (5)、三级液体种子培养：将二级种子培养液按10～30％的接种量接入装有450升总糖含量为8—20％、硒酸盐浓度为200～400微克／毫升(或用亚硒酸盐，其浓度为400～600微克／毫升)的麦芽汁培养基的大卡氏发酵罐，在25—32℃的条件下，搅拌培养l4—20小时，即为三级液体种子培养物。 (6)、发酵罐发酵培养：将三级种子培养液按20～40％的接种量接入装有2250升总糖含量为8—20％、硒酸盐浓度为200～400微克／毫升(或用亚硒酸盐，其浓度为400～600微克／毫升)的麦芽汁培养基的发酵罐，在25—32℃的条件下，搅拌培养l4—24小时。 (7)、收集酵母细胞及干燥：采用板框压榨或离心收集富硒酵母细胞。在45～85℃条件下风干，水分小于10％。 (8)、粉碎：用粉碎机将风干的富硒酵母细胞粉碎。 (9)、包装：用不透气的包装袋包装，即为高生物量的高富硒含量的富硒酵母，每克干富硒酵母细胞含有机硒达500-1500微克，分类命名为：酿酒酵母(富硒酵母)Saccharomyces cerevisiae，保藏号为：CGMCC N0．0539，保藏日为：2001年1月15日。 实施例2 生产方法依据不同地区的不同原料，可选择不同的发酵培养基配方、培养条件及含有高生物量和高硒含量的富硒酵母的生产工艺作适当增加或减少的调整变动。 本实施例是选择以淀粉水解糖为培养基，其发酵培养基配方和培养条件是： 总糖量为l2％淀粉水解糖，0.8％的玉米水解液，0.5％硫酸铵，350微克／毫升的硒酸盐或550微克／毫升的亚硒酸盐，培养基的pH为5.0，种子液的接种量为15％，在28—30℃的条件下，搅拌培养30小时。 其生产工艺包括： 斜面菌种→液体菌种→一级液体种子培养→二级液体种子培养→三级液体种子培养→四级液体种子培养→发酵罐发酵培养→收集酵母细胞及干燥→粉碎及包装高生物量高硒含量的富硒酵母。每克干富硒酵母细胞含有机硒达1000微克。 本实施例的生产工艺增加四级液体种子培养，其条件与三级液体种子培养大体相同，其他工艺条件与实施例l基本相同，故不重述。 实施例3 本实施例是选择以蔗糖糖蜜或甜菜糖蜜为培养基，其发酵培养基配方和培养条件是： 总糖量为15％的蔗糖糖蜜或甜菜糖蜜、l.O％的玉米水解液，0.8％硫酸铵，0.1％磷酸，300微克／毫升的硒酸盐或500微克／毫升的亚硒酸盐，培养基的pH为6.0，种子液的接种量为20％，26—28℃搅拌培养28小时。 其生产工艺包括： 液体菌种→一级液体种子培养→二级液体种子培养→三级液体种子培养→四级液体种子培养→五级液体种子培养→发酵罐发酵培养→收集酵母细胞及干燥→粉碎及包装高生物量高硒含量的富硒酵母。每克干富硒酵母细胞舍有机硒达l200微克， 本实施例的生产工艺增加五级液体种子培养，其条件与三级液体种子培养大体相同，其他工艺条件与实施例2基本相同，故不重述。 综上所述，的方法是充分利用微生物技术，依据不同酵母菌种的生理生化特性，通过筛选，获得生物量高的酵母菌种和抗硒能力强及细胞硒含量高的酵母菌种，然后采用杂交育种技术选育出含有高生物量和高硒含量的富硒酵母菌种，在优化的发酵培养基中发酵培养，获得含有高生物量和高硒含量的富硒酵母，这种含有高生物量和高硒含量的富硒酵母具有成本低、原料广泛、操作简便、发酵周期短、酵母细胞的生物量高和有机硒含量高等特点。采用的生产富硒酵母方法，适合大规模的生产和因陋就简小批量的生产，具有广泛的实际应用前景，并具有重大的社会效益和巨大的经济效益。 |
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