蛋白标签蛋白标签(proteintag)是指利用DNA体外重组技术,与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白,以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等。随着技术的不断发展,研究人员相继开发出了具有各种不同功能的蛋白标签。目前,这些蛋白标签已在基础研究和商业化产品生产等方面得到了广泛的应用。 美国GeneCopoeia(复能基因)为客户提供50多种蛋白标签,可以满足客户的不同需求,包括各种最新型的标签,如:SNAP-Tag?、Halo Tag?、AviTag?、Sumo等;也提供齐全的各种常用标签,如eGFP、His、Flag等等标签。 以下是部分蛋白标签的特性介绍,更加详细的介绍可在查询克隆产品的结果列表里面看到各种推荐的蛋白标签和载体。
TrxHISHis6是指六个组氨酸残基组成的融合标签,可插入在目的蛋白的C末端或N末端。当某一个标签的使用,一是能构成表位利于纯化和检测;二是构成独特的结构特征(结合配体)利于纯化。组氨酸残基侧链与固态的镍有强烈的吸引力,可用于固定化金属螯合层析(IMAC),对重组蛋白进行分离纯化。 使用His-tag有下面优点:
Flag标签蛋白Flag标签蛋白为编码8个氨基酸的亲水性多肽(DYKDDDDK),同时载体中构建的Kozak序列使得带有FLAG的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。 FLAG作为标签蛋白,其融合表达目的蛋白后具有以下优点:
MBP(麦芽糖结合蛋白)MBP(麦芽糖结合蛋白)标签蛋白大小为40kDa,由大肠杆菌K12的malE基因编码。MBP可增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性,尤其是真核蛋白。MBP标签可通过免疫分析很方便地检测。有必要用位点专一的蛋白酶切割标签。如果蛋白在细菌中表达,MBP可以融合在蛋白的N端或C端。
纯化:融合蛋白可通过交联淀粉亲和层析一步纯化。结合的融合蛋白可用10mM麦芽糖在生理缓冲液中进行洗脱。结合亲和力在微摩尔范围。一些融合蛋白在0.2% Triton X-100或0.25% Tween 20存在下不能有效结合,而其他融合蛋白则不受影响。 缓冲条件为pH7.0到8.5,盐浓度可高达1M,但不能使用变性剂。如果要去除MBP融合部分,可用位点特异性蛋白酶切除。 GST(谷胱甘肽巯基转移酶)GST(谷胱甘肽巯基转移酶) 标签蛋白本身是一个在解毒过程中起到重要作用的转移酶,它的天然大小为26KD。将它应用在原核表达的原因大致有两个,一个是因为它是一个高度可溶的蛋白,希望可以利用它增加外源蛋白的可溶性;另一个是它可以在大肠杆菌中大量表达,起到提高表达量的作用。GST融合表达系统广泛应用于各种融合蛋白的表达,可以在大肠杆菌和酵母菌等宿主细胞中表达。结合的融合蛋白在非变性条件下用10mM 还原型谷胱甘肽洗脱。在大多数情况下,融合蛋白在水溶液中是可溶的,并形成二体。GST标签可用酶学分析或免疫分析很方便的检测。标签有助于保护重组蛋白免受胞外蛋白酶的降解并提高其稳定性。 在大多数情况下GST融合蛋白是完全或部分可溶的。 HAHA标签蛋白,标签序列YPYDVPDYA,源于流感病毒的红细胞凝集素表面抗原决定簇,9个氨基酸,对外源靶蛋白的空间结构影响小, 容易构建成标签蛋白融合到N端或者C端。易于用Anti-HA抗体检测和ELISA检测。 c-MycC-Myc 标签蛋白,是一个含11个氨基酸的小标签,标签序列Glu-Gln-Lys-Leu-Ile- Ser-Glu-Glu-Asp-Leu,这11个氨基酸作为抗原表位表达在不同的蛋白质框架中仍可识别其相应抗体。C-Myc tag已成功应用在 Western-blot杂交技术、免疫沉淀和流式细胞计量术中, 可用于检测重组蛋白质在靶细胞中的表达。 eGFPeGFP标签蛋白,是增强型绿色荧光蛋白eGFP,激发波长为488nm,发射波长为507nm,其是由野生型绿色荧光蛋白GFP通过氨基酸突变和密码子优化而来的。相对于GFP,eGFP荧光强度更强、荧光性质更稳定。同时载体中构建的Kozak序列使得含有eGFP的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。 eGFP作为标签蛋白,其融合表达目的蛋白后具有以下优点:
此外由我公司提供的IRES双顺反子载体,可同目的基因共表达eGFP,用于目的基因的体内蛋白示踪研究。 eYFPeYFP标签蛋白为增强型黄绿色荧光蛋白eYFP,激发波长为513nm,发射波长为527nm,其是由野生型黄绿色荧光蛋白YFP通过氨基酸突变和密码子优化而来的。相对于YFP,eYFP荧光强度更强、荧光性质更稳定。同时载体中构建的Kozak序列使得含有eYFP的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。 eYFP作为标签蛋白,其融合表达目的蛋白后具有以下优点:
此外由我公司提供的IRES双顺反子载体,可同目的基因共表达eYFP,用于目的基因的体内蛋白示踪研究。 eCFPeCFP标签蛋白为增强型青色荧光蛋白eCFP,激发波长为433nm或453nm,发射波长为475nm或501nm,其是由野生型青色荧光蛋白CFP通过氨基酸突变和密码子优化而来的。相对于CFP,eCFP荧光强度更强、荧光性质更稳定。同时载体中构建的Kozak序列使得含有eCFP的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。 eCFP作为标签蛋白,其融合表达目的蛋白后具有以下优点:
Avi TagAviTag标签蛋白是一个15 个氨基酸的短肽,具有一个单生物素化赖氨酸位点,与已知天然可生物素化序列完全不同,可以加在目标蛋白的N端和C端。融合表达后,可被生物素连接酶生物素化,为了纯化重组蛋白选用低亲和性的单体抗生物素蛋白或抗生物素蛋白衍生物,除了用于蛋白质分离纯化,还用于蛋白质相互作用研究。
SNAP-TagSNAP-Tag是新一代的蛋白标签技术,不仅专一性极高而且稳定,最大的优点是适用于多种环境下的蛋白质检测与纯化,如活细胞内、溶液中、或固态相(如SDS-PAGE gels)等。 将纯化的或未纯化的SNAP-Tag融合蛋白与表面固定了苯甲基鸟嘌呤的基质混合,蛋白即可特异与底物作用,形成共价键,融合蛋白间接被固定在了基质表面上,可以达到更方便快捷地研究蛋白功能或纯化蛋白的目的。 Halo TagHaloTag?标签蛋白是一种脱卤素酶的遗传修饰衍生物,可与多种合成的HaloTag?配基有效地共价结合。这个分子量为33KDa的单体蛋白能融合在重组蛋白的N端或C 端,并在原核和真核系统中表达。 SUMOSUMO标签蛋白是一种小分子泛素样修饰蛋白(Small ubiquitin-like modifier),是泛素(ubiquitin)类多肽链超家族的重要成员之一。在一级结构上,SUMO与泛素只有18%的同源性,然而两者的三级结构及其生物学功能却十分相似。研究发现SUMO可以作为重组蛋白表达的融合标签和分子伴侣,不但可以进一步提高融合蛋白的表达量,且具有抗蛋白酶水解以及促进靶蛋白正确折叠,提高重组蛋白可溶性等功能。 荧光素酶(Luciferase)荧光素酶不是标签蛋白,但是由我公司提供的IRES载体,可同目的基因共表达萤火虫荧光素酶基因,用于目的基因的体内蛋白示踪研究。 |
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