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血涂片制作 取干净载玻片沾少许血液，另取一干净平滑的推片，将其一端与血接触，血液沿玻片线向两侧扩散，将推片与玻片保持30~45度匀速推进，留在载玻片上的薄层血即为血膜或血涂片。 注意：血滴最好放在载玻片2/3区域内距上下边约1~2毫米处；推片边缘平整光滑，保持角度不变，用力均匀，中间不能停顿，否则出现厚薄不均，呈锯齿状或波纹状，使染色不均匀。 试剂： Wright染液：Wright染料（Wright stain)0.1克放于研钵内，先加少量甲醇研磨成糊状，再加甲醇使之充分溶解，倒入棕色瓶内，将其余的甲醇（总量60毫升）全部倒入研钵中研磨，清洗研钵并倒入棕色瓶内。室温放几周或几月后使用。新配制的染液偏碱性，放置一段时间后呈微酸性，放得越久，染色越佳。密闭保存。 Giemsa染液： Giemsa染料（Giemsa stain)0.75克放入甘油50毫升内，置60℃温箱24小时，经常摇动，使染料和甘油混匀。加甲醇50毫升并振摇混合使之完全溶解，静置使用。染色时，取1毫升加蒸馏水或磷酸缓冲液（PBS）50毫升稀释，染色45分钟。 磷酸盐缓冲液（PBS）：1%磷酸二氢钾（KH2PO4）30毫升，1%磷酸氢二钠（Na2HPO4)20毫升，加蒸馏水至1000毫升 Wright染色法 将血涂片平放在染色架上，下垫白色布或纸； 往涂片上滴加Wright液数滴，盖满血膜，静置1~2分钟； 滴加等量蒸馏水或PBS并混匀，静置3~4分钟； 用蒸馏水冲洗使染液自然溢出至血膜呈淡红色； 将血膜上的甩掉，血膜向下斜立、晾干。 结果： 红细胞染成浅橘红色，呈双凹圆盘状，中央着色浅，周围较深； 中性粒细胞数量多，核多呈分叶状，核染色质块粗大，染成紫蓝色，胞质内分散细小的特殊颗粒染成红紫色； 嗜酸性粒细胞数量较少，核多为2叶，胞质内有粗大的嗜酸性颗粒被染成亮红色或枣红色； 嗜碱性粒细胞数量最少，核多呈S形，着浅蓝紫色，胞质有有大小不等的嗜碱性颗粒染成深紫色； 淋巴细胞内有少数嗜天青颗粒呈紫红色； 单核细胞核多呈肾形或马蹄铁形，染成浅蓝紫色，胞质浅灰蓝色，有少数红紫色嗜天青颗粒； 血小板呈星形或多角形，基质微 嗜碱性，含细小嗜天青颗粒呈红紫色。 注意： 染液对酸碱度较敏感，pH6.8~7.0适宜，着色鲜艳，效果好； 血涂片做好后立即染色，久存后染色效果较差； 血膜表面容易产生沉淀（染液外溢、干涸或冲洗前先倒掉染液）； 染色出现少数沉淀或红细胞颜色偏蓝，可将血涂片入80%酒精一次，蒸馏水冲洗即可； 血涂片染色后，以不封片、放干燥处避光保存较好；或用中性树胶直接封片，效果较好。 Giemsa染色法 待染的血涂片放在平稳的架子上； 滴加甲醇或无水酒精固定5~10分钟或更长，晾干； 滴稀释Giemsa染液20~30分钟或更长。 结果：与Wright染色相比，核质对比明显，嗜酸性粒细胞胞质中嗜酸性颗粒更鲜艳。 注意： 制血膜的载玻片应十分清洁。用洗衣粉与少量去污粉混合加水煮，流水冲洗，经洗液浸泡，流水冲洗，再浸蒸馏水，擦干备用。 |
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