实验原理
PL、PR启动子是大肠杆菌l噬菌体中控制早期转录的启动子，具有极强的起始RNA转录的功能，基因工程中常用它来构建高效表达载体，它受抑制物CI蛋白的负调控。在实际中CI蛋白被改造成温度敏感型(CIts)，由DNA片段CIts857（857bp长）编码。CIts在30℃时具有抑制启动子的活性，在42℃时失活而失去抑制启动子的活性，因此，改变工程菌的培养温度即可控制目的基因的表达，这一点比用诱导剂诱导表达的系统要节省操作步骤和成本，在大规模基因表达中优点尤其明显。有些表达载体本身带有CIts857片段，能自身编码CIts蛋白，对宿主的选择范围较宽；另一些表达载体自身不带CIts857片段，选择宿主茵时，要求宿主是有缺陷的原噬菌体溶源化的菌株（如M5219)，前一类载体表达效率往往更高。
将IL基因以5’端EcoRI和3’端BamHI酶切位点插入pBV220载体多克隆位点中，转化到大肠杆菌JMl03内，便能通过温度的变换控制CI蛋白的活性，继而调节启动子的活性，使IL基因连同其5’端上游带SD序列转录成mRNA并转录终止于rrnB位点，SD序列与ATG的间距为6bp，mRNA作为模板使核糖体高效翻译出IL产物。
实验材料和试剂
（一）实验材料
1．载体：pBV220为中国预防医学科学院病毒学研究所构建。
2．质粒pUCl8-IL。
3．大肠杆菌JMl03。
（二）培养基
l．LB液体培荞基，LB固体培养基（同实验一）。
2．加氨苄青霉素（Amp）的LB固体培荞基（同实验一）。
（三）试剂
1．酶类：EcoRI、BamHI、T4DNA连接酶。
2．DNA回收试剂盒。
（四）仪器
PCR自动扩增仪微量移液器
离心机电泳仪
水平电泳槽透射紫外观察仪
实验步骤
1．用EcoRI和BamHI酶切pBV220（1mg）（酶切方法见实验四），pBV220经纯化后待用。
2．用EcoRI和BamHI酶切pUCl8-ILDNA（4mg），酶切好的600bpILDNA片段用DNA回收试剂盒回收待用。
3．取0.2mg酶切好的pBV220载体加0.2mg的600bpILDNA片段，用T4DNA连接酶连接（见实验五）。
4．取连接产物转化JMl03感受态菌，涂布于加Amp的LB固体培养基上。
5．快速抽提质粒；酶切鉴定重组质粒
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