诺氟沙星检测

氟哌酸（又名诺氟沙星）检测

摘要

    

　　广谱抗生素。无臭，味微苦；在空气中能吸收水分，遇光色渐变深。本品在二甲基甲酰胺中略溶，在水或乙醇中极微溶解，在醋酸、盐酸或氢氧化钠溶液中易溶。本品的熔点为218～224℃。本品为胶囊剂，内容物为白色至淡黄色粉末。 
　　

药理毒理

本品为氟喹诺酮类抗菌药，具广谱抗菌作用，尤其对需氧革兰阴性杆菌的抗菌活性高，对下列细菌在体外具良好抗菌作用：肠杆菌科的大部分细菌，包括枸椽酸杆菌属、阴沟肠杆菌、产气肠杆菌等肠杆菌属、大肠埃希菌、克雷伯菌属、变形菌属、沙门菌属、志贺菌属、弧菌属、耶尔森菌等。对多重耐药菌亦具抗菌活性。对青霉素耐药的淋病奈瑟菌、流感嗜血杆菌和卡他莫拉菌亦有良好抗菌作用。诺氟沙星为杀菌剂，通过作用于细菌DNA螺旋酶的A亚单位，抑制DNA的合成和复制而导致细菌死亡。
　　

实验分析

方法名称

高效液相色谱法测定氟哌酸的含量。

方法原理　　将待测品溶液注入高效液相色谱仪，利用C18色谱柱进行色谱分离，采用紫外吸收检测器于278nm波长处进行检测。参照标准品谱图保留时间定性，外标法定量计算诺氟哌酸含量。
试剂
　　1.0.025mol/L磷酸溶液（用三乙胺调节pH值至3.0）
　　2.乙腈（色谱纯）
　　3.三乙胺溶液

4. 0.1mol/L盐酸溶液

5.超纯水或二次蒸馏水
　仪器及设备
　　1.高效液相色谱仪(紫外检测器)

2.超声波

3.溶剂过滤器装置

4.针筒式过滤器 

5.振荡仪

6.100ul微量进样器
　色谱条件
　　色谱柱：Venusil ASB C18 色谱柱（4.6×250mm，5μm）

         S/N:S9520525B10050

流动相：0.025mol/L磷酸溶液：乙腈=87%：13%（V:V）

流速：1.0ml/min
　　检测波长：280nm

进样量：20ul（手动进样，20ul定量环）
　　柱温：室温
　试样制备
　　1. 标准品溶液的制备　　

精密称取标准品适量，加流动相溶液溶解并配制成每mL含25μg的溶液，即25μg/ml，振荡仪摇匀，微膜过滤，备用。

　　2.样品溶液的制备
　　精密称取本品0.2g，置100mL容量瓶中，并加入0.1mol/L盐酸溶液20mL使溶解后，加超纯水或二次蒸馏水稀释至刻度，振荡仪摇匀，精密量取1mL，置10mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，振荡仪摇匀，微膜过滤，备用。
　　测试操作步骤
　　按以上色谱条件，依次精密吸取上述标准品溶液与样品溶液各60μL注入高效液相色谱仪，通过外标法计算出氟哌酸含量。
标准品色谱图如下：

 

最小检出限测试：

按以上色谱条件进0.25μg/ml标准品溶液，计算得最小检出限0.01μg/ml.

色谱图如下：

精确度测试：

按以上色谱条件对同一样品连续进样6次，精确度误差定性RSD=0 38%，定量RSD=0.63%。

测试图谱如下：

准确度测试：

分别配制浓度0.2μg/ml、0.5μg/ml、1.0μg/ml、2.5μg/ml、10μg/ml的标准品溶液，待仪器稳定后，按以上色谱条件，依次进样，并计算，得标准曲线方程：Y = 4.0924 e - 0.005 * X + 1.3686，相关系数：R=0.9998。

标准曲线图如下：

 

样品的测定：

按以上色谱条件进样品溶液，色谱图如下：

结论

利用此方法检测氟哌酸具有准确、可靠，检出限低，峰形好，出峰快，前处理简单等优点。本方法适合氟哌酸含量的检测。