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企盒银花多梧的研究制 李玉平，张利，黎晓敏* (西南大学动物科技学院，重庆400715 ) Research Situation on Flos lonicerae Polysaccharide LI Yuping, ZHANG Li, LI Xiaomin* (Department of Animal Science, Southwest University, Chongqi鸣400715 ， China) Abstract: Honeysuckle was antibacterial, antiviral and anticoagulant, antioxidant and so on, which is main chemical composition of honeysuckle polysaccharide. This paper summaried the honeysuckle polysaccharide extraction, isolation, purification, structure and biological activity and so on. Key words: flos lonicerae; polysaccharide; extraction method; separation and purification; biological activity 金银花为忍冬科植物忍冬、红腺忍冬、山银花 或毛花枝忍冬的干燥花蕾，在神农本草经中被列为 上品，其性寒，味甘，有清热解毒、凉散风热之功 效[1]。用于治疗温病发热、风热感冒、痛肿师毒、热 毒血病、房漏便血等[ 2]。金银花富含挥发油类、有 机酸类化合物及黄自同类、三菇类、环烯酿菇类、醇 类、微量元素等活性成分，且具有广谱抗菌、抗病 毒、抗肿瘤、增强免疫及解热抗炎、利胆、保肝、 降脂、抗生育、止血、抗溃癌等多种药理作用[ 3]。 植物多糖是一类重要的生物活性物质，具有免 疫调节、抗肿瘤、抗病毒、抗辐射、延缓衰老及抗 感染等多种作用，且对机体的毒副作用小[4 )。近年 来研究较多的活性多糖有银杏多糖、黄茂多糖、桑 校皮多糖、香菇多糖、雪茶多糖、拘把多糖、灵芝 多糖等[5-11 )。以往对金银花的研究主要集中在绿原 收稿日期2010-12-06 基金项曰:重庆市兽药工程技术研究中心项目(CSTC 2009CB lOlO)。 酸、黄自同类等小分子物质上，对于金银花大分子物 质多糖的研究较少。 近年来，许多学者从金银花中提取了多糖，并 对金银花多糖的结构及其生物活性进行了一系列的 研究。本文针对近年来金银花多糖的提取方法、分 离纯化、结构分析以及生物学活性的研究成果加以 概述，为金银花资源的进一步开发及其药理作用提 供理论依据。 1 金银花多糖的提取 多糖提取采用的方法主要有热水提取法、酸提 取法、碱提取法、超声波提取法、微波提取法和酶 提取法等，近年来研究最多的提取方法是热水提取 法和超声波提取法。 1.1 热水提取法 热水提取法是传统提取多糖的一种方法，也是 作者简介:李玉平(1 986-) ，女，河南林州人，硕士研究生，研究方向为中药质量研究。 *通讯作者:教授，硕士生导师， Email: lixiaomin662@sina.com 。 2011 年第2期饲料博览2 唱 目前最常用的一种方法。该方法的基本原理是相 似相溶原则，根据大多数多糖在热水中洛解度较 大的性质进行提取。该法具有设备简单、操作方 便、适用面广等优点，但存在操作时间长、收率 低、需多次反复操作、能耗较高等缺点。通过对 金银花多糖的提取工艺进行优化后，可使金银花 多糖的提取率有所提高。 张玉等采用热水提取金银花粗多糖，氯仿、 石油酷等除去脂溶性杂质， Sevag 法除蛋白，最后 用乙醇将其从水提物中沉淀析出，分离、干燥得 出金银花多糖，试验中以金银花多糖的提取率和 含量为指标，对浸提时间、浸提温度、氯仿萃取 次数和所用乙醇浓度等因素进行单因素试验，采 用正交试验法筛选出了最佳的提取条件，即50 g 金银花中加入水1.5 L ，提取3 次，浸提时间2 h , 浸提温度90 OC , 50 mL 氯仿萃取3 次，乙醇浓度 为80% ，结果多糖提取率为4.789毛，金银花多糖相 对百分含量为78.10%[1飞邓庆华用正交试验法优 化金银花多糖水提醇沉法的提取工艺，通过对浸 提温度、时间、料液比和浸提次数4 个因素进行单 因素试验，用苯盼-硫酸法测定多糖含量，考察了 这些因素对金银花多糖提取率的影响。结果显 示，最佳提取条件温度为90 OC 、料液比1: 10 、浸 提2 次、每次60 min ，得出金银花粗多糖样品中糖 的含量为249毛[l 3)。刘光海等对金银花1 kg采用热水 法提取， 4 倍量的元水乙醇沉淀来制备金银花粗多 糖，用Sevag 试剂法除去蛋白来获得相对纯的精制 多糖，苯盼-硫酸法测定多糖含量，结果为提取粗 多糖25 1.4 g ，获得精制粗多糖39 .4 g ，而且精制后 金银花粗多糖纯度大大提高，多糖的含量由 6 1. 27%升至80.54%(14) 。 1.2 超声波提取法 超声波提取法是目前应用较多的方法。超声 波是一种高频机械波，频率为15-60 kHZ ，超声波 能产生空化作用、热效应、机械作用等，这些作 用促进了有效成分的溶解，加快了有效成分进人 介质，并与介质充分混合，可加速提取过程，提 高提取率。研究表明，超声法具有快速安全、简 单、成本低、不被破坏等优点，与传统的热水浸 提法相比，多糖提取率高，提取时间短，从而提 高了产品数量和质量。 杨凡等采用传统水煎煮法和超声波法提取金 22 饲料悔览2011 年第2 期 银花多糖，试验中分别对两种提取方法的提取工艺 进行优化，同时也将超声波预处理与传统水煎煮法 结合起来提取多糖，进而比较各种方法的多糖提取 率，试验结果表明，出水提取法在温度为90 OC , 料液比为1:15 ，蒸f留水提取4 次，提取时间为2.5 h 时可以获得最佳提取效果，而超声波法在料液比为 1: 15 ，超声时间为120 min 时，多糖提取率为 16.8% ，超声波预处理与传统水煎煮法相结合最佳 试验条件为超声预处理时间9 min ，料液比1: 1.5 , 温度90 OC ，提取时间45 mino 试验结果表明，将 超声预处理与传统水煎煮法相结合可以将金银花多 糖提取率提高43.9% ，并缩短提取时间50%[15)。赵 鹏等采用响应面法优化金银花多糖超声提取工艺， 研究了超声时间、液料比、提取次数和提取温度对 多糖产出率的影响，最终确定金银花多糖提取工艺 的最佳条件为温度75 OC 、时间43 日lln 、液料比为 23:1 、提取2 次，得出多糖提取率达到3.2639毛，进 而表明超声法与传统水提取法相比，最大的特点是 提取时间缩短约2/3，所得金银花多糖提取率也有 了一定程度的提高[1飞 2 金银花多糖的分离纯化 多糖的纯化就是指去除粗多糖中的杂质而获得 单一多糖组分。一般将获得的粗多糖除去共存杂 质、蛋白质等非多糖组分，再对多糖组分进行分 级。多糖分离纯化的方法很多，常用有分步沉淀 法、阴离子交换柱层析法、凝胶色谱法等。对于金 银花多糖的分离纯化、组成分析的研究报道比较 少。 李尔春对提取的金银花粗多糖去蛋白、经DEAE- 52 离子交换纤维素柱色谱和SePhedexG-I00 凝胶柱色谱分离出FL-Cl ， FL-D1, FL-D23 种 组分，采用SePhadexG -200 凝胶柱色谱和高效凝胶 渗透色谱法对所分离组分纯度进行纯度鉴定，表明 FL-Cl , FL-D1两种组分均为单一组分问。殷洪 梅等采用Sev吨法、酶法和酶-Sevag 法对金银花多 糖提取物进行脱蛋白处理，进行脱蛋白方法的研 究，结果显示Sevag 法、酶法、酶-Sevag 法的蛋白 脱除率分别为85.72% 、73.28% 、84.50% ，而多糖 的损失率是56.579毛、3 1. 229毛、29.35% ，结论是酶Sevag 法去蛋白效果最好[l飞 3 金银花多糖的组成和结构分析 邓庆华在用正交试验法优化金银花多糖水提取 沉淀的提取工艺的过程中，通过气相色谱法测定了 样品中的单糖组成，结果表明，金银花待测样含有 鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、半乳糖及葡萄糖等单 糖。对待测样品进行了分子量分布的观察，显示分 子量分布范围比较宽[13]。李尔春对金银花多糖分离 纯化后，采用气相色谱分析和红外光谱分析对所分 离组分进行单糖组成分析，结果表明FL-C1 由葡 萄糖(Glu) 、半乳糖(Gal)、核糖(Rib) 、阿拉伯糖 (Ara) 、木糖(Xyl)、果糖(Fru) 组成。FL一D1由葡 萄糖(Glu) 、半乳糖(Gal)、木糖(Xyl)、阿拉伯糖 (Ara) 、鼠李糖(Rha) 组成。FL-D2 由葡萄糖 (Glu) 、半乳糖(Gal)、甘露糖(Man) 、核糖(Rib) 、 阿拉伯糖(Ara) 、木糖(xyl)、果糖(Fru) 组成问。 4 金银花多糖的生物学活性 多糖是生物体内一类重要的信息分子，具有增 强免疫调节、抗肿瘤、抗突变、降血脂、降血糖、 抗病毒、抗凝血、抗攒殇、抗氧化等多种生物活 性。虽然金银花多糖研究较少，但作为多糖类物 质，具有与其他多糖相似的生物活性。 林雄平等利用水提法从金银花和苦T茶中提取 水溶性多糖，用圆形纸片法对7 种常见的食品腐败 菌(即枯草芽抱杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆 菌、普通变形杆菌、啤酒酵母、桔青霉、黑曲霉) 进行抑菌活性研究，并测定其最小抑菌浓度。结果 显示，金银花多糖提取物对金黄色葡萄球菌和啤酒 酵母的抑菌圈直径分别达18.2 和16.0 mm ，最小抑 菌浓度(MIC) 都在5-30 mgomL飞表明金银花和苦 丁茶多糖提取物具有一定程度的抗细菌与抗真菌活 性，且抗细菌活性比抗真菌活性强[1飞李尔春通过 金银花多糖在体外和体内抗氧化作用来研究其抗氧 化的生物活性，结果显示，金银花粗多糖的总还原 力随着浓度的增加逐步升高，并与多糖浓度有很好 的相关性，同时金银花多糖对PMS-NADH-NBT 系统产生的超氧自由基有显著的抑制作用。对小鼠 体内抗氧化作用的研究则通过测定血清或组织中的 超氧化物歧化酶(SOD) 活性、过氧化氢酶(CAT) 活 性、丙二醒(MDA) 含量、谷脱甘肤过氧化物酶 (GSH-Px) 活性等指标来评价多糖的抗氧化活'性， 结果表明，金银花多糖提取物可以显著提高受试小 鼠血清、肝脏及脑组织中SOD 、CAT 、GSH-Px 的活 性，显著降低血清、肝脏、脑组织内MDA含量，说 明金银花多糖提取物有显著的抗氧化活性[17]。殷洪 梅等采用正交试验设计方法优选金银花多糖的最佳 提取工艺，利用Sevag-酶法除去蛋白，并将得到的 多糖对小鼠进行迟发型超敏反应，对环磷酸腺胶 致免疫低下组进行血清溶血素试验和脏器指数试 验，进而研究多糖的免疫活性。试验结果表明，金 银花多糖具有明显的免疫增强作用，旦药效和剂量 相关问。 5 小结 随着分子生物学的发展，多糖的各种生物活性 已得到广泛关注，其生物活性强、毒副作用小，且 具有抑菌、抗氧化和免疫增强的作用，因此对金银 花多糖进行深入研究具有十分重要的意义和开发应. 用价值，近年来对金银花多糖的研究还存在很多不 足，主要表现在用于提取金银花多糖的方法较多， 但是所获多糖含量不太高，需要选择其他的提取方 法，对现用提取方法进行不断改善，对各方法的提 取工艺进行优化筛选，进而提高多糖产出率;含量 测定方法大多为测定总糖的比色法，不能如实地反 映多糖含量，需要进一步矫正;用现有提取方法所 得到的金银花多糖多为粗品，含较多杂质，仍需进 一步纯化，这就要对分级纯化的方法进行研究;金 银花多糖的化学结构还不明确，构效关系尚不清 楚，有待进一步研究;药理活性研究也主要停留在 行为学、器官和组织水平，活性机理不清楚，需要 深入研究。因此，金银花多糖提取方法的筛选和纯 化工艺、多糖的构效关系以及生物活性的深人研究 应该作为今后的主要研究方向。 [参考文献} [ 1] 张永清，王丽萍，刘志敏.金银花名称本草考证[1].山东中医药 大学学报， 1998, 22(6): 456. [2] 中华人民共和国卫生部药典委员-中华人民共和国药典[MJ. 北京:人民卫生出版社， 1990. [ 3] 刘雄，高建德.金银花质量控制、化学成分及药理学研究进展 口]甘肃中医学院学报， 2006， 23(4): 46-48. [ 4] 韩飞飞，吴绵斌，孔繁智.天然活性多糖药理作用研究进展[J]. 西北药学杂志， 2006 ， 21(2): 91-92. [5] 仰榴青，徐佐旗，吴向阳，等.银杏多糖的研究进展[J]. 食品科 学， 2004(11):372-375 [ 6] 苏伟，赵利，刘建涛，等.黄精多糖抑菌及抗氧化性能研究口] 食品科学， 2007 ， 28(8) 另一57. 2011 年第2 期饲料悔览23 [ 7] 费建明，赵丽华，占鹏飞，等桑枝皮多糖对小鼠的免疫调节试 验口].蚕业科学， 2009， 35(4): 907-912. [ 8] 林秋莺，姚金梅，陈丽华，等.香菇多糖的免疫调节作用及研 究进展口].今日科苑， 2009(2): 155. [ 9] 龚涛，王晓辉，赵翻，等.拘祀多糖抗氧化作用的研究[1].生物 技术， 2010, 20( 1): 84-86. [10] 张丙灿，左绍远，董莎莎雪茶多糖对免疫功能的影响口]亚太 传统医药， 2010， 6 (3): 12-14 [ll] 向俊字，徐安，周婷婷，等.灵芝多糖的研究进展[1].药学实践 杂志， 2010(4): 241-244. [12] 张玉，马力，陈文.醇析水提法提取金银花多糖[1].医药导报， 2006, 25( 1l): 1118-1120. [13] 邓庆华.用正交试验法优化金银花多糖提取工艺[D]. 长春东 ::I~师范大学， 2008. i一莽撞颐问: 奶牛热应激是指当温度超过26 'C，温度超过80% 时牛只会出现喘气和张口呼吸J 直肠或奶温升高，奶、 牛活动减少或多数奶牛站立不动，奶牛拥挤在水槽周 围等临床症状。 1 热应激对牛只的影晌 热应激使奶牛的采食量下降、抵抗力下降、产奶、 量下降;牛奶酸度下降(酒精阳性)、牛奶中钙含量下 降、乳脂和乳蛋白下降;发情率降低、发情周期紊 乱、受胎率下降、抑制胎盘生长、胚胎死亡率增加。 2 奶牛的适直温度 奶牛是恒温动物，对奶牛来说，维持体温的恒定 比生长、泌乳等生产任务更重要。绝大多数品种的奶 24 饲料博览2011 年第2 期 [14] 刘光海.金银花多糖的提取、精制及含量测定[1].湖南中医药 大学学报， 2009， 29( ll): 33-34. [15] 杨凡，王婿伟，许瑞波，等.超声波技术用于金银花多糖的提取 日]天津化工， 2008 ， 22(6): 49-5 1. [16] 赵鹏，李稳宏，朱骤海，等晌应面法优化金银花多糖超声提取 工艺研究口].食品科学， 2009 ， 30(20): 151-154 [17] 李尔春.金银花多糖的分离纯化与生物活性研究[D]. 西安:陕 西师范大学， 2009. [18] 殷洪梅，尚强，萧伟.金银花多糖脱蛋白方法的研究[J]. 中草 药， 2010(4): 26. [19] 林雄平，陈晓清，苏育才，等.金银花和苦丁茶多糖提取物抗菌 活性研究[1]亚热带植物科学， 2008 ， 37 (1): 51-53. [20] 殷洪梅，吕新勇，萧伟金银花多糖的制备工艺优化及免疫活 性研究[1].中国中药杂志， 2010， 35(4): 453-455. 牛耐热性能要差于耐寒性青巨，包括我国普遍饲养的黑、 白花奶牛。奶牛最适宜的生理温度为15-'-22 '?言在5~:τ 二 28 'c范围内，不会对奶牛产生较明显的冷应激或热Jft 水，并在水槽上方搭建遮阳棚;补充多维电解质，在 水槽里添加电解多维二提高日粮营养放度，适当提高-. 精料饲喂量，减少粗料饲喂量;目粮中添加缓冲剂二 日粮中添加碳酸氢铀能缓解因精料饲喂
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