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外周血单个核细胞的分离 (Separation of mononuclear cell in peripheral blood)
外周血单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)即外周血中具有单个核的细胞，包括淋巴细胞和单核细胞。体外检测淋巴细胞首先要分离外周血单个核细胞，目前主要的分离方法是Ficoll-hypaque（葡聚糖－泛影葡胺）密度梯度离心法，因为血液中各有形成分的比重存在差异，因此得以分离。红细胞和粒细胞密度大于分层液，同时因红细胞遇到Ficoll而凝集成串钱状而沉积于管底。血小板则因密度小而悬浮于血浆中，唯有与分层液密度相当的单个核细胞密集在血浆层和分层液的界面中，呈白膜状，吸取该层细胞递经洗涤高心重悬。本法分离单个核细胞纯度可达95％，淋巴细胞约占90％～95％，细胞获得率可达80％以上，其高低与室温有关，超过25℃时会影响细胞获得率。 分类表：
血细胞寿命 1、红细胞-携带氧的“运输兵”红细胞是血细胞中最多的细胞，内含血红蛋白，它能把人体从肺部吸入的氧气结合后，通过备注徨再释放给各组织，因此被称为携带氧气的“运输兵”。 红细胞的平均寿命为120天，每天均有细胞衰老、死亡、也就是说，每天约有20亿个红细胞死亡。 2、白细胞—人体健康的“卫士”白细胞能吞噬进入人体的细菌和病毒以及代谢产生的对人体有害的“异物”，白细胞还有免疫功能。 白细胞的平均寿命很短，约7-14天。 粒细胞在骨髓内经10天左右释放入血液，在血液不到1天然后溢出血管进入组织或体腔内。在组织或体腔内可以行使防御功能2－3天。素爱老的粒细胞被单核-巨噬细胞系统清除，也有一部分从口腔、气管、消化道和泌尿生殖道排出。淋巴细胞：B淋巴细胞寿命较短，一般3－4天，景观抗原刺激后分化为浆细胞，产生特异性抗体，参与体液免疫。T淋巴细胞寿命较长，可达数月，甚至数年，经抗原致敏后，可产生多种免疫活性物质，参与细胞免疫。单核细胞放入血液，在血中停留3－6天，即进入组织演变为巨噬细胞寿命可达2－3个月。 血小板—凝血的“功臣” 尽管血液凝固是一个相当复杂的过程，但不可否认血小板在血液凝固中发挥的作用。因此，血小板被称为凝血的“功臣”。 血小板的平均寿命约为7-9天。 2、T淋巴细胞是骨髓中的淋巴干细胞移行至胸腺内分化发育而成。它们是人体内数量最多和具有多方面功能的一类淋巴细胞，约占周围血中淋巴细胞的50％～70％。T淋巴细胞的生成依赖于胸腺，故也被称为依赖胸腺淋巴细胞，“T”即英文胸腺(thymus)的第一个字母。T淋巴细胞离开胸腺随血流或淋巴液进入淋巴结的副皮质区、脾脏的动脉周围淋巴鞘等全身外周免疫器官，在血液与各种淋巴组织之间不停地再循环，能够直接攻击侵入人体的微生物和体内的肿瘤细胞等，发挥细胞免疫功能。T淋巴细胞的寿命不一，短寿命的可以为几周，长寿命的可长至十几年或终身。在普通光学显微镜下观察，T淋巴细胞与B淋巴细胞几乎没有什么区别，而在电子显微镜下观察则可以发现T淋巴细胞的体积较大，表面较光滑，有少数粗而短的微绒毛。根据T淋巴细胞不同的发育阶段、表面标记和免疫功能，又可将其分为：①辅助性T淋巴细胞。②抑制性T淋巴细胞。③杀伤性T淋巴细胞。④免疫记忆性T淋巴细胞。⑤放大作用的T淋巴细胞等若干个亚群。 |
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