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我做过大约5～10KD的蛋白质的WB,希望提供的意见对你有帮助。应该用Tricine-SDS-PAGE来电泳，普通的变性胶很难分离小分子量的蛋白质；凝胶的浓度为16.5％T和3％C就差不多；最关键的一步是转移后你的PVDF膜一定要在固定液中固定，否则在经过后续处理后小分子量的蛋白质基本上被洗脱或者扩散了，我们通常是在转移完毕后，先用超纯水漂洗一下膜，然后在TBS中过渡清洗5分钟左右，然后用含0.2％戊二醛的TBS固定45分钟，再依照WB的步骤处理后面的过程，后来能得到很好的结果，否则明明蛋白转移到膜上了，后来却消失不见，更不用说免疫检测了。 其它的具体步骤你可以找相关的文献参考。 |
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