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霉菌和酵母的计数

 生物探索 2014-04-09
     孟加拉红培养基(虎红琼脂)用途:

  供霉菌和酵母的计数、分离和培养用(GB/T4789.15-2010和化妆品卫生规范微生物检验方法2007版)。

  孟加拉红培养基(虎红琼脂)使用原理:

  蛋白胨提供碳源和氮源;葡萄糖提供能源;磷酸二氢钾为缓冲剂;硫酸镁提供必须的微量元素;琼脂是培养基的凝固剂;氯霉素可抑制细菌的生长;孟加拉红作为选择性抑菌剂可抑制细菌的生长,并可减缓某些霉菌因生长过快而导致菌落漫延生长。

  孟加拉红培养基(虎红琼脂)配方(每升):

  蛋白胨5g

  葡萄糖10g

  磷酸二氢钾1g

  硫酸镁 0.5g

  琼脂15g

  孟加拉红 0.03g

  氯霉素0.1g

  最终pH 7.2±0.2

  使用方法(计数用法):

  1、称取孟加拉红培养基(虎红琼脂)31.6g,加入蒸馏水或去离子水1 L,搅拌加热煮沸至完全溶解,分装三角瓶,121℃高压灭菌20min。

  2、无菌操作称取检样25克(或25mL),放入含有225mL灭菌水的玻璃三角瓶中,振摇30min,即为1:10稀释液,依次做1:100、1:1000……稀释。

  3、根据对样品污染情况的估计,选择2—3个合适的稀释度,分别在做10倍稀释的同时,吸取1mL稀释液于灭菌平皿中,每个稀释度做2个平皿。

  4、将凉至45℃左右的培养基注入平皿中,待琼脂凝固后,倒置于25—28℃温箱中培养。

  5、3d后开始观察结果,共培养观察5d。

  6、计算方法:通常选择菌落数在10—150之间的平皿进行计数(如食品卫生国家标准),也有选用5—50个之间的平皿进行计数(化妆品卫生规范),同稀释度的2个平皿菌落平均数乘以稀释倍数,即为每克(或每mL)检样中所含霉菌和酵母菌数。

  质量控制:

  本品倾注平皿后呈玫瑰红色,下列菌株接种后20—25℃培养72h生长情况如下表。

  菌 名      菌 号     生长状况    菌落特征

  黑曲霉     ATCC16404    良好  菌丝白色孢子黑色,底部玫瑰红色

  白色念珠菌   ATCC10231   良好    菌落表面呈奶油色

  大肠埃希氏菌  ATCC25922  被抑制      ——

  贮 存:贮存于避光、阴凉干燥处,用后立即旋紧瓶盖。贮存期三年。

  规 格:250g

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