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香菇体菌种的培育，一般有孢子分离法、组织分离法和蒸水分离法三种。孢子分离法是有性繁殖，菌种生活力强，但变异率高，一般难掌握，选育新品种时可采用此法。组织分离法及菇木分离法系无性繁殖，种性比较稳定、而且简便易行，生产上应用较多。 <1>培养基配制的原理 培养基是香菇菌丝体生长发育的基质、可以提供香菇菌丝体生长发育所必需的水分、碳源、氮源、各种元素和生长因素，使菌丝体能正常、健壮地生长。 a.水分：香菇菌丝中含有大量的水分。水分不仅是菌丝细胞原生质的主要成分，而且菌丝的一切生理活动均需在有水的情况下进行。因此，在配制各级培养基时，均要加入一定量的水分。 b.碳源：单糖(葡萄糖)、双糖(蔗糖、麦芽糖)、多糖(淀粉)都是香菇菌丝能够利用的有机碳源。一般来说，碳素是菌丝细胞中有机物的基本元素，并且也是能量的来源。 c.氮源：氮素是构成菌丝细胞中的蛋白质和核酸的主要元素，而蛋白质和核酸又是细胞质和细胞核的重要成分，生命活动中起着重要的生理作用。有机氮(氨基酸、蛋白质、尿素)和氨态氮(硫酸铵)都是菌丝细胞氮的来源。 d.无机盐类：菌丝所需的无机盐类数量很少，但在其生命活动中都是不可缺少的。在配制培养基时，要加入少量的磷、钾、硫、钙、镁等。培养基中加入磷酸二氢钾、硫酸镁、硫酸钙等，可满足对上述元素的要求。
 e.生长因素：能调节香菇菌丝代谢活动的微量有机物，称之为生长因素。一般用作碳源的天然成分，如马铃薯、麦芽汁、麸皮、米糠等都含有丰富的生长因素，无需另加。维生素B1可促进香菇菌丝生长，制斜面培养基时可加入少量。 f.凝固剂：常用的凝固剂为琼脂(洋菜)，是由石花菜提制而成。培养基中各种营养物质的比例对香菇菌丝生长的影响很大。要根据香菇菌丝生长对各种营养物质的需要按比例配制。要注意对培养基pH值的调节。 <2>培养基配制的方法 香菇菌种分为母种、原种和栽培种三种。 a.母种培养基的制作配方： 马铃薯200克;葡萄糖20克;琼脂18～20克;水1000毫升(pH值5.5～6) 该配方适合香菇及多种食用菌分离和培育母种之用。如果作保藏菌种用，在配方中可再添加磷酸二氢钾2克，硫酸镁0.5克，维生素B110毫克。 制法：选择质量好的马铃薯洗净去皮(已发芽的要挖去芽及周围一小块)，将其切成薄片，称取200克。放入铝锅中，加入清水1000毫升，加热煮沸，维持30分钟，用四层纱布过滤，取其汁液，然后将琼脂放在水中浸泡后加入马铃薯汁液中，继续加热至全部溶化(加热过程中要用玻璃棒不断搅拌，以防溢出和焦底)，最后加入葡萄糖，并且热水补足1000毫升，测定并调节pH值(用5%的稀盐酸或5%的氢氧化钠溶液)到所需范围内。配制好的培养基要趁热分装入试管，装入量约为试管长度的1/5，装管时要注意勿使培基沾附试管口。分装完毕塞上棉塞，棉塞要求松紧适度，塞入长度约为棉塞总长度的2/3左右，使之既有利通气又能防止杂菌侵入。 塞好棉塞后，把试管直放在小铁丝筐中，盖上油纸或牛皮纸，用绳扎好，或用绳子把试管扎成几捆，棉塞部分用牛皮纸包扎好，竖直放入高压灭菌锅内，进行灭菌，在1.5公斤/厘米2压力下维持30分钟。 灭菌后，待培养基温度下降至60℃时，再撰成斜面，以防冷凝水积聚过多。摆斜面时，先在桌上放一木棒，将试 管逐支斜放，使斜面长度不超过试管总长度的 1/2，冷却凝 固后，即成斜面培养基。 灭菌后的斜面培养基，要进行无菌测定，可从中取出2～3支，放入30℃左右的恒温箱中培养3天，培养后表面如 仍光滑，无杂菌出现，就可供接种。多次制作后，已有把握，可不做无菌测定试验。 高压灭菌操作步骤和注意事项： (Ⅰ)在灭菌锅内加水至水位标记高度，首次使用需先进行一次试验，水过少易烧干造成事故，水过多棉塞易受潮。 (Ⅱ)放火锅内的材料，不宜太挤，否则会影响蒸汽的流通和灭菌效果。体积大的瓶子，要分层放置或延长灭菌的时间。 (Ⅲ)盖上锅盖，同时均匀拧紧锅盖上的对角螺旋，勿使漏气，关闭气阀。 (Ⅳ)点火、逐渐升温。水沸后，待锅内压力升至0.5 公斤/厘米2时，逐渐开大放气阀，放净锅内冷空气至压力降至"0"，再关闭放气阀。如不放尽冷空气，即使加大至所需压力，而温度达不到应有的程度，也不能达到彻底灭菌的要求。 (V)继续DO%至所需压力时，开始记灭菌时间，调节火力大小，始终维持所需压力至一定时间。 (Ⅵ)停火。让压力自然回降至"0"时，打开放气阀。 (Ⅶ)打开锅盖，用木块垫在盖下，让蒸汽渐渐溢出，借余热烘干棉塞。 (Ⅷ)取出已灭菌的材料，并清除剩水，以防锅底锈蚀。 b.原种培养基的制作 配方甲： 锯木屑78%;米糠(或麸皮)20%;蔗糖1%;硫酸钙(石膏粉)1%;水适量; 配方乙： 棉籽壳40%;锯木屑40%;麸皮或米糠20%;蔗糖1%;石膏粉1%;水适量 制法：木屑以阔叶树的为好，棉籽壳(木屑)均要求干燥无霉烂、无杂质。米糠或麸皮要求新鲜、无虫。将木屑(或棉籽壳)与麸皮、石膏粉拌匀，蔗糖溶于水，将其加直至用手紧握一把培养料时，指缝间有水渗出而不下滴为宜。然后将其装入菌种瓶中，边装边用捣木适度压实，直装至瓶颈处为止，压平表面，再在培养基中央钻一洞直达瓶底。最后用清水洗净瓶的外壁及瓶颈上部内壁处，上棉塞。用牛皮纸包住棉塞及瓶口部分，用绳扎紧。放入高压锅内，在1.5 公斤/厘米2的压力下维持1.5小时。如采用土法灭菌，当蒸笼内达100℃后再维持6～8小时。 c.栽培种培养基的制作 栽培种培养基的配方及制作方法同源种。当采用其他用料栽培香菇时，可将上述两种配方中的锯末屑用料代替，其余成分不变，构成多种代用料配方。 <3>菌种的分离和培育 香菇菌种制作分母种、原种、栽培种三个逐步扩大的阶段。实践证明，香菇菌种的好坏优劣，不仅直接影响到香菇的产量和质量，而且关系到香菇栽培的成败。因此，必须认真做好菌种分离和培育工作。 a.母种的分离和培育 母种是菌种生产的关键，直接关系到原种和栽培种的质量，也是香菇丰产的保证。因此，必须认真做好种菇的选择和分离培育工作。 种菇要选择符合该品种特性的个体：要在出菇早、出菇均匀、产量高的菌块上或菇木上挑选，选出朵形端正、盖肉肥厚、柄短粗、无虫害的子实体做种菇。 组织分离法：选择符合种菇要求的菇蕾。用75%酒精揩拭表面后，用小刀把菇蕾纵剖为二，在菌盖与菌精交界 处，切取0.5立方厘米的一小块菌肉，移放在斜面培养基中央。如用已开伞的香菇做分离材料，则选菌盖与菌柄交界的菌肉。 接种后，将试管放在22℃～24℃恒温箱中培养2～3天后，组织块上长出白色的菌丝，并向培养基上蔓延生长。当菌丝在斜面上长满后，再移到新的斜面培养基上，培育成母种。 b.原种和栽培种的培育 把母种接到木屑(或棉籽壳)、米糠培养基上进行培育，用以繁殖栽培种用的菌种称为原种。已培育好的母种用接种针挑取蚕豆大一小块放入原种培养基上，经22℃～24℃下培育35～45天，菌丝体长满全瓶，即成原种。母支每种约可接6～8瓶原种。 原种直接到相同培养基中扩大培养;用于压块用种为栽培种。从原种里掏出菌种移入灭过菌的瓶子中，培养温度22℃～24℃，培育时间约2个月以上。每瓶原种可接栽培种60～80瓶。 培育原种和栽培种注意事项： 第一，原种及栽培种的接种必须遵照无菌操作要求。 第二，当接种后，从第三天开始就要经常检查有无杂菌污染，发现有污染的瓶子要及时取出处理。一般检查要继续到香菇菌丝体覆盖整个培养基表面并深入培养基2厘米时为止。 第三，培养好的菌种如暂时不用，要将其移放在凉爽、干净、清洁的室内避光保存，勿使菌种老化。 <4>菌块的制作 掏瓶作块的时间，7月中旬制作的栽培种，10月上旬即可掏瓶作块。掏瓶时要求作到：掏瓶用具、瓶口、盛器及掏铲等所用工具均用0.1%高锰酸钾溶液或2%～3%来苏儿消毒;要剥尽老化褐色菌皮，要尽量成块掏出，切勿掏得过碎;要随掏随做块，不要推得过久，更不宜过夜。 做块方法：将掏出的菌种倒入30厘米见方，边高为7厘米的框内，用手压实，四周要紧一些，块的表面压平，不宜过紧过松。用配方甲一般11～12瓶菌种可做菌砖一块(30厘米2)，厚度以4.5厘米左右;若用配方乙时，一般12瓶菌种做一块，厚度6厘米上下为宜。 菌块直接压在势有消过毒的塑料薄膜的木架或地上，块与块之间距离3～4厘米，以利空气流通。压好后用薄膜覆盖，以利保湿。 其中正确掌握香菇菌丝的菌龄，选择适宜的季节压块，是香菇生产中的一大关键。 菌丝的生产过程，就是累积营养的过程。当养分积累到一定时期，在外界条件(如温度、水分、空气、光、营养、PH值)影响下，产生突变，以营养生长转入生殖生长，即菌丝生长进入子实体生长。 菌龄太长;瓶壁上形成一层很厚的菌皮，这是营养被消耗、菌龄老化的一种表现，压块后，虽然转色较快，但颜色略淡;这时压块若遇高温(30℃以上)菌丝容易衰老，造成霉烂。菌龄太短，菌丝成熟度不够，仍处旺盛生长阶段，压块后，菌丝容易徒长，转色也慢，颜色黄褐色，由于营养积累不足出菇也就延迟。
 因此，压块最适宜的菌龄(即菌丝成熟度)应该是： ① 菌丝发展到瓶底和塑料袋底的10～20天，此时瓶壁处开始呈现白色突起(原基); ②透过瓶可看到瓶内表面的菌丝洁白，中央黄白色; ③揭开瓶盖塞有浓厚的菇香气味; ④菌种上表面覆盖一层黑褐的菌膜，菌种本身粘结力很强。以上四点是完全成熟菌种的特点。 具有以上特点的菌种即可掏瓶做块。由于菌龄适当，压块后菌丝愈合快，转色及时呈红棕色，若外界条件适宜，一般压块后15～20天左右便可现蕾。 菌龄是内因，当菌龄适宜时，还必须给其合适的外界环境条件，才能使菌丝体发生突变，形成子实体。香菇属变温型菌类，菌丝体生长适温是25℃，子实体是15℃。如关中地区一般在10月上中旬压块，此时气温已降至25℃以下，并在做块后则天内，能维持22℃～25℃;以后气温下降，正值出菇时期，因此，各地栽培香菇必须根据当地气候条件正确确定做块时期，才能获得香菇的高产。 |
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