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质粒加的太多了。少加一点就可以了。 AMP是否失效了 Amp失效，或者涂太多了，或者说培养过度了 Originally posted by qingfengwuat 2009-12-3 17:27: 不是质粒，转的连接产物质粒加的太多了。少加一点就可以了。 平板的问题，氨苄失效了。或是感受态细胞本身带有质粒。连接产物一般不会长那么多。可以挑个菌摇一下试试。 1、抗生素失效 2、转化效率较高，菌液涂布的较多 3、感受态细胞有问题，染了杂菌或者其他的问题 平板太潮，涂板前放培养箱里烘1-2个小时 这种小问题也拿出来问？做实验没有主动性，怎么做研究？ 氨苄失效会这样，我也遇到过，用新配的就好了。 转化过得，就不是质粒了么？笑话，作为载体，只是引入了你的外援片段而已，质粒的属性没变 可能原因：1，抗生素失效，倒置选择压降低 2，涂平板的技术问题，不是菌液越多越好 希望对你有所帮助。另：你用的是PMD18-T的载体吧，这个常用，基本不存在问题 :) 抗生素失效的可能性大些， 楼主菌液就算涂多，能涂多多少，太多了他根本涂不干，菌液还四处流呢，怎么倒置，除非楼主根本就不管这些，管他菌液涂的样，就无所谓的倒置培养，以至于菌液四流。 转化效率高到重组菌整板生长的情况，呵呵呵，应该很低吧，要真是那样，楼主该去偷着乐了 多半是氨苄失效了。 只有8楼回答对了。我再补充一点，涂板时，涂均了就行，不要一直涂到完全吸收为止，虽然还有液体在培养基的表面，正面放置一个小时后再倒置培养。 涂布棒一直搅动会将其表面的那层膜划破，致使出现一片白，而看不到单菌落。 氨苄青霉素失效或者是感受态被污染。后者更有可能！ 转化完成这后，离心浓缩之后少弃上清，涂布的时候去100微升或者更少，要不就干脆不离心浓缩，直接涂布。 这个问题我们也经常遇到，很疑惑，尤其是电转的时候。
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