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刘欢 赵磊 西北农林科技大学 植保学院 一、 实验目的 利用沃丰素200倍液灌根同时辅以靓果安200倍液喷雾处理猕猴桃树后，测定猕猴桃叶片叶绿素含量的变化 二、 原理 根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比，即： A＝αCL 式中：α比例常数。当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm时，α为该物质的吸光系数。各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。 如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和。这就是吸光度的加和性。今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A，并根据叶绿素a、b及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。在测定叶绿素a、b时为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。 三、 实验步骤 1) 沃丰素200倍液灌根和靓果安200倍液喷雾处理猕猴桃树，每隔10天处理一次，共处理5次，之后采集叶片。 2) 取新鲜植物叶片，擦净组织表面污物，剪碎（去掉中脉），混匀 3) 称取剪碎的新鲜样品2g，共3份，分别放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙粉及2～3ml 95％乙醇，研成均浆，再加乙醇10ml，继续研磨至组织变白，静置3～5min 4) 取滤纸1张，置漏斗中，用乙醇湿润，沿玻棒把提取液倒入漏斗中，过滤到100ml棕色容量瓶中，用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次，最后连同残渣一起倒入漏斗中 5) 用滴管吸取乙醇，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入容量瓶中。直至滤纸和残渣中无绿色为止。最后用乙醇定容至100ml，摇匀 6) 把叶绿体色素提取液倒入光径1cm的比色杯内。以95％乙醇为空白，在波长665nm和645nm下测定吸光度 7) 将测定得到的吸光值代入下面的式子： 叶绿素A=（12.7A665-2.69A645）×【V/（1000×W）】 叶绿素B=（12.7A645-2.69A665）×【V/（1000×W）】 四、 实验结果  对照组：A645=0.144 A665=0.367实验数据（3次重复处理） A645=0.211 A665=0.549 A645=0.174 A665=0.444 叶绿素A=0.264mg/g 叶绿素B=0.051mg/g 实验组：A645=0.363 A665=0.931 A645=0.358 A665=0.913 A645=0.313 A665=0.806 叶绿素A=0.514mg/g 叶绿素B=0.100mg/g
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