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莫愁：今天是右哉为大家带来的万事屋Seminar，文章有点长，大家要是看不下去的话，就直接拉到华丽丽的分割线后面吧……嘿嘿…… 实验万事屋作品 右哉：今天我要为大家讲的文章是一篇发表在The Journal of Clinical Investigation（IF：13.765）上的文章，题目是《IL-6R/STAT3/miR-34afeedback loop promotes EMT-mediated colorectal cancer invasion and metastasis》。 实验万事屋作品 看标题大家应该已经明白了个大概了，这个文章将要展示的构架是一个Il6>STAT3>MiR-34a的一个回路，而这个回路会对肠癌的侵袭转移有很大的影响。 实验万事屋作品 首先在Introduction中介绍了一个概念：有研究表明炎症能促进肠癌的侵袭转移。这就是这篇文章所提出的科研问题，所有的研究都是围绕这这个科研问题而来的。 实验万事屋作品 说到炎症，就要说一下促炎性细胞分子Il6，说到了Il6，就会让人想起JAK-STAT信号通路。而说到肿瘤侵袭转移，有个经典的分子，就是由P53诱导表达的MiR-34a，这个MiR可以抑制SNAIL表达，来起到抑制转移的作用。（莫愁：简单讲一下JAK-STAT信号通路，其实就是白介素激活受体上的JAK，使JAK把STAT3磷酸化，两个pSTAT3与STAT4结合形成三聚体入核，进行转录调控） 实验万事屋作品 根据这些已知的线索，作者将文章分为五个部分： 实验万事屋作品 第一部分：Il6促肿瘤侵袭的机制及IL-6R/STAT3/miR-34a环路 实验万事屋作品 首先作者验证了Il6能直接促进转移，然后验证了确实是通过JAK-STAT途径上的STAT分子起到的作用。（莫愁：验证上下游是通路研究是一个必不可少的部分，这个我们在华丽丽的分割线后再细说一下。） 实验万事屋作品 实验万事屋作品 而磷酸化激活的STAT3又那么巧会结合在MiR-34a的基因组DNA上，抑制了MiR34的表达。（莫愁：这里主要是ChIP的分析实验） 实验万事屋作品 实验万事屋作品 通过实验证明，万万没想到，Il6激活STAT3的关键蛋白Il6R正巧受到了MiR34a的调控。于是，就形成了一个IL-6R/STAT3/miR-34a环路。（莫愁：负反馈条件是这篇文章的一个亮点） 实验万事屋作品 实验万事屋作品 第二部分：IL-6R/STAT3/miR-34a环路在肿瘤侵袭转移中的作用 实验万事屋作品 在Il6激活的情况下，STAT3磷酸化激活，就导致了MiR34a被抑制，使细胞拥有了间质细胞表型，转移能力增强。 实验万事屋作品 实验万事屋作品 第三部分：MiR-34a对于Il6的抑制所产生的反馈调节 实验万事屋作品 那不是还得有负反馈么，MiR34a不是还能抑制Il6R表达么，而P53激活后可以促进MiR34a的表达，那同样P53会不会通过这个负反馈途径来抑制转移呢？实验结果证实是这样。（莫愁：用阿霉素诱导表达P53和tet on/off载体，都是常见的诱导表达载体） 实验万事屋作品 实验万事屋作品 第四部分：临床样本 实验万事屋作品 这个环路临床意义大不大呢？通过对肠癌患者的表达统计，表明，这个环路确实与转移侵袭有相关性意义。（莫愁：转移侵袭与STAT3磷酸化、IL6R表达正相关，与MiR34a表达负相关。临床数据对于一篇文章来说也是一个质量的考验，有临床数据作为佐证，文章不会太差的。） 实验万事屋作品 实验万事屋作品 第五部分：动物实验 实验万事屋作品 动物实验要求的是高大上，那就用转基因小鼠吧。将小鼠做成MiR34a缺失型纯合的，和MiR34a突变的（pSTAT3无法结合）,发现，突变的MiR34a确实没有发生转移，而缺失MiR34a由于环路的平衡被打破，导致了肠癌的浸润和转移。（莫愁：这里用到了LoxP-Cre酶的转录技术，这种技术在转基因中非常常见，常常用于一些胚胎致死基因的表达中） 实验万事屋作品 实验万事屋作品 …华丽丽的分割线… 实验万事屋作品 李莫愁博士：大家看完这次Seminar之后没睡着吧？哈哈……十多分的文章会有些长，往往就吃不透。我们慢慢来剖析一下，从这篇文章我们可以深入分析的有以下这么几点： 实验万事屋作品 1）如何研究信号通路的分子上下游关系 实验万事屋作品 通常的方法是这样的：将两种因子A和B分别做基因沉默，沉默A gene 看看A和B表达的情况，然后沉默Bgene再看看A和B表达的情况。上游的因子被沉默表达后，下游的因子肯定表达下调或不表达。而下游因子被沉默表达后，上游因子的表达不会受影响。 实验万事屋作品
实验万事屋作品 初步判断上下游关系后，做回补实验，也就是敲除上游基因后，过表达下游基因，使得表型得到回复。 实验万事屋作品 2）文章的科研思路 实验万事屋作品 这篇文章的思路包括两个方面：第一，也就是我们之前提到的“Filling Gaps”，Il6到JAK-STAT通路是已知的，而P53诱导MiR34a抑制SNAIL表达也是已知的，文章做的关键点，仅仅是将这两者串联了起来，填补了一个未知的空白。 实验万事屋作品
实验万事屋作品 为什么能发现这个未知空白呢？估计大家也会这么想，凭什么就这么巧，找到MiR34a呢？这就是这篇文章的另一个思路——“Horizontal Growth”，这是什么意思呢？“Horizontal Growth”也就是移植研究。STAT3作为JAK-STAT通路的分子开关研究的很多，主要的研究就是结合Genomic DNA，结合的下游分子多了，那会不会也能结合到MiR34的Genomic DNA上呢？将原有的研究思路移植到这个研究中，就是所谓的“Horizontal Growth”。 实验万事屋作品 通过对这样思路的剖析，大家是不是觉得豁然开朗了呢？ 实验万事屋作品 3）讲故事的方式 实验万事屋作品 其实讲故事的方式对于文章来说也会有亮点，其实说实话，你如果细想一下，文章所做的P53激活MiR34a表达诱导了整个通路的负反馈来抑制细胞的EMT基本上就是脱了裤子放屁。本身P53激活了MiR34a的表达后，就能直接抑制EMT嘛！ 实验万事屋作品 打个比方：你说从上海出发坐动车可以直接到苏州。但是我要讲的故事是我发现了一条海路，从上海坐船到天津，然后从天津坐汽车到廊坊，过了廊坊后能搭车去北京，从北京坐飞机也能到苏州。第一，整条通路我描述得完整，证明充分；第二，整个通路是未经发掘的，有创新性；第三，复杂的反馈调节，更能吸引人眼球。这就是你到苏州和我到苏州的不同之处。 实验万事屋作品
实验万事屋作品 大家也可以通过回复来看之前的三篇Seminar哦，回复下面的数字就行了。回复“s004”就给你个这篇文章的下载链接吧。 实验万事屋作品 170 【万事屋Seminar】3分SCI文章的简单思路 177 【万事屋Seminar】简单策略：如何把别人的芯片变成我的Plos One 184 【万事屋Seminar】热气腾腾的5分SCI——LncRNA & ceRNA 实验万事屋作品 好了，今天就讲那么多了，对了，大家如果对文中的实验技术有兴趣的话，可以点击投票，我看看能不能写出来给大家看一下。 实验万事屋作品 |
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