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一、至今为止，应用于临床的常用抗体有几十种，在这当中又可分为两种类型。 1、浓缩型抗体 根据近几年来使用的情况认为，它有许多优点，但也有许多不足之处： ① 可作为各种疾病检测的常备抗体。 ② 成本低，价格较便宜。 ③ 需要稀释抗体，手续较为复杂。 ④ 需要配置各型号的微量加样器，以利于量取精确的抗体量。 ⑤ 需要具备一定的英语水平，因为浓缩型的抗体多为进口试剂，其使用书都以英文为主，其中涉入抗体的来源，适应让稀释对什么组织或细胞可起反应等。 2、即用型抗体。 近几年来，免疫组化技术应用的推广，即用型抗体的应用越来越受到人们的欢迎，根据几年来的使用，认为它有许多优点和不足： ① 使用方便。 ② 对于不具备或基本不懂免疫组化技术的人，只要按照说明书的方法使用，也能获得理想的结果。 ③ 不需要配置多种昂贵的微量加样器。 ④ 特别适合于基层单位。 ⑤ 价格较浓缩型抗体贵。 ⑥ 即用型抗体不可作为常备贮存抗体。 二、抗体的适应症 在众多的抗体中，按它们的实际使用范围，把它们分为两个类： 1、适合于冰冻切片，涂片，细胞培养片。 2、适合于石蜡切片，冰冻切片，涂片和细胞培养片。 三、选择合适的单克隆或多克隆抗体 抗体除了分为上述的两个类外，从其克隆的高度讲，也有单克隆和多克隆之分。 1、单克隆抗体，在目前临床常用的抗体当中，大部分都是单克隆抗体。这要归功于生物技术的不断提高。在早些时候，应用于临床的抗体，大多数为多克隆抗体。 2、多克隆抗体，在临床应用的抗体中，还有少部分的抗体为多克隆抗体。 四、抗体的加入 这看似很简单的问题，如果处理不好也可导致不同的结果，如果应用自动免疫组织化学染色仪，将程序输入即可，如为手工操作，就必须注意以下的问题： 1、当PBS冲洗完毕后，在加入抗体，如一抗，二抗或三抗。必须将存留于切片上的多余的PBS摔干，但不能让切片干涸，切片干涸，往往可产生非特异性染色，切片上PBS存留过多，将会稀释加入的抗体，影响加入抗体的浓度，同时也将影响最后的结果，如假阴性等。 2、加入的抗体以一滴为佳。当擦干组织块周边多余的PBS后，切片保持着一定的湿润度，此时加入另外的抗体为最佳时候，滴入抗体以一滴50ml为好，加入后，轻微地摇匀地覆盖于切片上，使最后的结果稳定均衡，不至于有的地方有反应，有的地方无反应。 3、切片没擦好将会影响加入抗体的质量，切片没冲洗干净，没擦试好，当加入抗体后，它可缩于切片的一边，此时你为了使加入的抗体能够完全地覆盖整个切片，便会使劲地加入抗体，此时的结果是，抗体依然滑向一边，或者完全露出，这不光没达到目的，还浪费抗体，正确的做法就是彻底地用PBS冲洗，摔干切片擦干切片周边的PBS，再滴入一滴抗体轻轻摇匀即可。 五、选择合适的孵育时间 第一抗体的孵育时间，有较多的使用范围，应用于临床检测抗体的孵育时间。一般室温下孵育在30-60分钟，120分钟，对于研究性质的抗体孵育时间，也可按照上述的时间，但也有人提出于4℃冰箱中过夜孵育，根据我们的经验一般不主张于4℃冰箱中过夜，原因是： 1、长时间的孵育可以使一些非特异性的物质沉淀下来，或者被吸附，造成背景的染色。 2、目前销售的抗体，纯度较高，特异性较强，不需要长时间的孵育，也能够结合得很好。 3、长时间的孵育，较容易引起切片的脱落，造成染色的失败。 4、长时间的孵育，不利于临床病理报告的发出。 |
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