伊红,是我们常用的染料,英文名为Eosin,又叫四溴荧光素,是一种混合物。伊红是生物学上常用的染料,一般观察细胞用的HE染色,其中的E就是伊红的简称。
因为常用,所以科里面有许多以前购买的伊红试剂,反正我们上班之后一直用的就是那些试剂,技术员说,从来没有购买过。不过最近技术员说配置的伊红不怎么着色,她用的方法大概是2.5-5g伊红,溶于500毫升蒸馏水中配称伊红染液;后来我看了一下,还有其他的方法,就用另外一种方法:伊红0.5克,蒸馏水75毫升,95%的酒精25毫升,以前用这种方法配的着色还行,不过这次用这种方法配,着色效果也不是很好。
大家找不到原因,最后担心是不是试剂时间太长,过了失效期了?不过试剂瓶上并没有有效期一说。就想到到病理技术网上问问,后来丁老师给了一个方法:2.5克溶于500毫升水当中,然后加入10毫升浓盐酸,静置过夜然后过滤,之后把放置烤箱内烤干,用这些干燥物,加95%的酒精1000毫升配称原液,用时可以用1:1到1:2的比例稀释。
其实这个方法以前看到过,只不过没有看明白。最主要的疑惑就是不知道用水溶解之后过滤剩余的该如何处理?难道要把这些滤液倒掉吗?所以一直有着用的一个疑问。这个疑问是因为我们用的是水溶性的伊红,在水中的溶解度比较高,简单的方法直接就可以使用,这些滤液倒掉岂不可惜。
但是实际操作的时候,发现原来自己的担心是多余的。
因为伊红溶解添加浓盐酸10毫升之后,原来的水溶液逐渐出现浑浊,最后慢慢地出现分层,上层的是淡黄色的清亮液体,而下面粉红色的絮状沉淀。原来是添加酸之后,水溶液里出现了絮状沉淀。这样伊红是不会随着过滤流掉的。看到这个现象才明白了这样做的目的,这样第二天过滤之后,原来的伊红不仅没有减少,似乎反而多了点。这样做的目的是把原来的水溶性的伊红变成了醇溶性的了。
之后按照操作,加入95%的酒精配成原液,我看了一下醇溶性伊红的配制方法,2.5克也就可以配置成500毫升的伊红溶液。当天让技术员试了试,着色非常好,稍不注意,伊红染色就过了。
不过500毫升,是手工用的量,要是在染色机上,要1000毫升才行,可是这次因为是试做,所以没有敢用太大的量。可以配置成1000毫升的染液。想想丁老师的是用的饱和液,没有介绍具体比例,而后来在百度百科里面给的比例是2.5克,可以配成1000毫升的染液。想想技术员之所以稍一染色,就出现染色过的原因,估计是染液浓度太大,看来下周稀释一下,可以直接使用了。
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