干货分享 | 细胞污染的思考（二）

1、从物品、用品消毒灭菌着手

细胞培养所用物品清洗、消毒要彻底，各种溶液灭菌除菌要仔细，并在无菌试验阴性后才能使用，并且需要尽快使用，特别注意容易染菌的液体如培养基，琼脂糖，血清等需要在低温保存，减少染菌的几率。操作室及剩余的无菌器材要定期清洁消毒灭菌。。

2、从操作者做起

（1）操作者责任心要强，要细心稳重，操作技术要熟练。在制定好实验步骤后，头脑清醒的进无菌室进行实验。备好一切所需要的试剂和培养瓶，防止在操作过程中来回跑动寻找，增加染菌的几率。在实验前要用肥皂洗手或用5%新洁尔灭浸泡5 分钟，按规定穿隔离衣。进入后关好门，坐下来尽量少走动。工作开始要先用5%新洁尔灭擦手、擦带进的培养基瓶壁，和无菌操作台。严格遵守无菌操作规则。事先要严格检查器材、溶液和培养物，不要把污染品或未经消毒的物品带入无菌室内，更不能随便使用，以免造成大批污染。尽量减少在超净台中物品的放置，特别注意不能将物品放置在流通空气的虑孔上，以免降低整个超净台的工作效率。

（2）操作者动作要轻，必须在火焰周围无菌区内打开瓶口，并将瓶口转动烧灼，注意火苗要旺盛，如果酒精灯中的酒精用尽要及时补充。要尽量使用侵斜试剂瓶45°的管架，减少垂直放置培养瓶造成染菌的机会。操作时尽量不要谈话，若打喷嚏或咳嗽应转向背面。

（3）操作时要常更换吸管，切勿一根吸管做到底。一旦发现吸管口接触了手和其他污染物品应弃去。实验完毕及时收拾，保持实验室清洁整齐，最后用消毒水浸泡的纱布擦台面。

（4）操作过程中头脑清醒，动作敏捷果断，打开的培养瓶和瓶口应远离操作者手势范围，避免影响垂直的空气流将操作者身上的病菌带到培养细胞中。废液钢尽量避免使用敞口的容器，倾倒时要抬高一点，防止在倾倒废液时溅起的液体污染瓶口。

（5）防止细胞交叉污染

在进行多种细胞培养操作时，所用器具要严格区分，最好做上标记便于辨别。并按顺序进行操作，避免一起进行时易发生混乱。在进行换液或传代操作时，注射器和滴管不要触及细胞培养瓶瓶口，以免把细胞带到培养液中污染其他细胞。所有细胞一旦购置，或从别处引入，或自己建立，均应及早留种冻存，一旦发生污染可弃之复苏，重新培养。