一、基本分析内容 o数据库检索与成员鉴定 o进化树构建 o保守domain和motif分析. o基因结构分析. o转录组或荧光定量表达分析. 二、数据库检索与成员鉴定 1、数据库检索 1)首先了解数据库用法,学会下载你要分析物种的基因组相关数据。一般也就是下面这些数据库了 oBrachypodiumdb:http://www./ oTAIR:http://www./ oRice Genome Annotation Project :http://rice.plantbiology./. oPhytozome:http://www./ oEnsemble:http://ensembl./genome_browser/index.html oNCBI基因组数据库:http://www.ncbi.nlm./assembly/?term= 2)已鉴定的家族成员获取。 如何获得其他物种已发表某个基因家族的所有成员呢,最简单的就是下载该物种蛋白序列文件(可以从上述数据库中下载),然后按照文章中的ID,找到对应成员。对于没有全基因组鉴定的,可以下列数据库中找: a. NCBI: nucleotide and protein db. b. EBI: http://www./. c. UniProtKB:http://www./uniprot/ 2、比对工具。一般使用blast和hmmer,具体使用命令如下: oLocal BLAST formatdb–i db.fas–p F/T; blastall–p blastp(orelse) –i known.fas–d db.fas–m 8 –b 2(or else) –e 1e-5 –o alignresult.txt. -b:output two different members in subject sequences (db). oHmmer (hidden Markov Model) search. Thesame as PSI-BLAST in function. It has a higher sensitivity, but the speed islower. Command: hmmbuild--informatafaknown.hmmalignknown.fa; hmmsearchknown.hmmdb.fas>align.out. 3、过滤。 oIdentity: 至少50%. oCover region: 也要超过50%或者蛋白结构域的长度. odomain: 必须要有完整的该蛋白家族的。工具pfamdb (http://pfam./) 和NCBI Batch CD- search. (http://www.ncbi.nlm./Structure/bwrpsb/bwrpsb.cgi). oEST 支持 o Blast and Hmmer同时检测到 4、通过上述操作获得某家族的所有成员 明天继续! |
|
来自: sailing_387 > 《待分类》