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一. 教学内容： 体外受精和早期胚胎培养
二. 学习内容 本节内容是在哺乳动物体内受精和胚胎发育的理论基础上，着重简述哺乳动物体外受精和胚胎早期培养的技术方法。内容简单，容易掌握，但应对体外受精在家畜快速繁殖中的重要意义和哺乳动物体外受精技术的主要操作步骤有深刻体会，领悟其探究的方法，并能通过学习，简述哺乳动物体外受精技术的主要操作步骤，简述哺乳动物胚胎的早期培养方法，绘制出“试管牛”工厂化生产的技术流程图解。
三. 学习重点 （1）体外受精在家畜快速繁殖中的重要意义。 （2）哺乳动物体外受精技术的主要操作步骤。
四. 学习难点 （1）卵母细胞的采集和培养。 （2）精子的采集和获能。
五. 学习过程 1. 知识框架
方法一：对实验动物小鼠、兔和小家畜猪、羊等卵母细胞采集时，可先用促性腺激素处理，使其排出更多的卵子，然后在适当的时间从输卵管冲取卵子，并使其直接与获能的精子在体外受精。方法二：从刚屠宰的雌性动物体内摘取卵巢，再从卵巢中采集卵母细胞。方法三：直接从活体动物的卵巢中采集卵母细胞，叫活体采卵。需借助超声波探测仪、内窥镜或腹腔镜，直接从活的动物卵巢中吸取卵母细胞。后两种方法适用于大家畜和大动物。 注意：采集的卵母细胞需在体外培养成熟后才能与获能的精子受精。 3. 用于体外培养的卵母细胞选择和培养 在选择卵母细胞时，无论用哪种方法采集到的卵母细胞，外围一般都应该有数层卵丘细胞所包围，形成一个叫卵丘复合体的结构（COC）。这种结构对于卵母细胞在体外条件下的成熟是十分重要的。在对家畜体外受精的操作中，一般把未成熟的卵母细胞分成A、B、C、D四级。对A级卵母细胞要求是有3层以上的卵丘细胞包围，卵母细胞的细胞质均匀；B级是少于3层卵丘细胞，但卵母细胞质要均匀；C级为没有卵丘细胞包围的卵母细胞，又称裸卵，培养效果很差；D级是退化或死亡的卵母细胞，应淘汰。A、B两类卵母细胞培养效果较好。 4. 采集精子的方法、受精过程
主要分为假阴道法、手握法和电刺激法。假阴道法是用特制的假阴道，满足雄性动物交配时对压力、温度和润滑度的要求。同时要配备有与供精动物相适应的台畜，训练动物爬跨台畜，借假阴道收集精液。手握法是通过徒手或戴乳胶手套的手，直接把握雄性动物阴茎，施以适当压力和刺激即可引起射精，并可收集富含精子部分的精液。电刺激法是采用特制的电极伸入动物的直肠直接刺激位于腰荐部的射精中枢引起射精，此方法只适用于野生或某些经济动物。此外，对于啮齿类的实验动物可在处死后从附睾尾收集精液。 5. 胚胎的早期培养 精子与卵子在体外受精后，将受精卵移入培养液中继续培养； 培养液成分：一般比较复杂 无机盐、有机盐、维生素、激素、氨基酸、核苷酸、血清等 胚胎发育到适宜阶段： 体外移植： 冷冻保存： 目前，从屠宰场废弃的卵巢中，每个卵巢平均可采集10枚左右可用卵母细胞，经体外培养成熟和受精后约可获4枚可用的胚胎，经过移植给受体母牛，最终可得到1～2头犊牛。牛的体外受精胚胎的工厂化生产已在一些发达国家开展。“试管牛”工厂化生产的技术流程图解：
【模拟试题】 1. 下列关于体外受精技术的说法中，错误的是（ ） A. 体外受精技术需要的温度大约为37 ℃ B. 体外受精是从初级卵母细胞和初级精母细胞开始的 C. 体外受精技术已成为一项常规的动物繁殖生物技术 D. 体外受精技术可用于研究动物生殖细胞的发生机制 2. 对家畜进行卵母细胞采集时，可先用处理（ ） A. 促性腺激素 B. 促性腺激素释放激素 C. 肝素 D. 性激素 3. 从活体动物的卵巢中直接采卵时，不正确的方法是（ ） A. 超声波探测仪 B. 内窥镜 C. 腹腔镜 D. 阴道镜 4. 精液保存的方法是（ ） A. 高温保存 B. 常温保存 C. 低温保存 D. 超低温保存 5. 在体外受精前，要对精子进行（ ） A. 纯化处理 B. 获能处理 C. 电刺激 D. 超声波处理 6. 卵母细胞培养到______期时，就可以与获能精子进行体外受精了（ ） A. ＭＩ B. ＭＩＩ C. 桑椹期 D. 囊胚期 7. 精子的顶体由来自细胞质的______变成（ ） A. 线粒体 B. 中心小体 C. 高尔基体 D. 纺锤体 8. （多选）采取精子的方法是（ ） A. 假阴道法 B. 手握法 C. 筒握法 D. 电刺激法 9. 精子和卵子在体外受精后，应将受精卵移入（ ） A. 受体动物体内 B. 培养箱 C. 发育培养液 D. 冷库冷藏 10. （多选）精子体外获能的方法有（ ） A. 化学法 B. 电刺激法 C. 培养法 D. 冷藏法 11. （多选）利用假阴道采精时，要求假阴道应具备的条件是（ ） A. 适宜温度 B. 适宜压力 C. 适宜润滑度 D. 适宜气味 E. 适宜湿度 12. （多选）用化学法使精子获能，采用化学药物是一定浓度的（ ） A. 氯化钠溶液 B. 肝素 C. 钙离子溶液 D. 磷酸缓冲液 E. 钙离子载体A23187 13. （多选）体外受精的主要步骤是（ ） A. 卵母细胞的采集 B. 卵细胞的采集 C. 精子的采集 D. 受精 14. （多选）常规的胚胎移植的技术环节包括（ ） A. 胚胎采集 B. 胚胎检查 C. 胚胎培养、保存 D. 胚胎移植 15. 体外培养哺乳动物胚胎的培养液应用以下哪些成分（ ） ① 无机盐 ② 有机盐 ③ 激素 ④ 蛋白质 ⑤ 葡萄糖 ⑥ 维生素 ⑦ 氨基酸 ⑧ 核苷酸 ⑨ 脂肪酸 ⑩ 血清 A. ①②④⑤⑥⑧⑨⑩ B. ①③⑤⑥⑦⑧⑩ C. ①②③④⑥⑦⑧⑨⑩ D. ①②③⑥⑦⑩ 16. 下列关于促进雌性动物大量排卵的叙述中，正确的是（ ） A. 给未成年的雌性动物注射大量的相关激素，使其排卵 B. 给性成熟的雌性动物注射大量的相关激素，使其超数排卵 C. 给未成年的雌性动物注射一定的相关激素，使其排卵 |
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