高效液相法测定醋酸亮丙瑞林注射液中醋酸亮丙瑞林的含量

【关键词】  高效液相色谱法；醋酸亮丙瑞林；测定

【摘要】  目的  采用高效液相色谱法测定醋酸亮丙瑞林注射液中醋酸亮丙瑞林的含量。方法  采用Diamonsil钻石C18柱（250mm×4.6mm 5μm）；以磷酸二氢铵溶液（取磷酸二氢铵11.5g，加水950ml，用氨水调节pH值为7.0）-乙腈（70：30）为流动相；流速为1.0ml/min；检测波长为220nm。结果  醋酸亮丙瑞林在9.66～86.94mg/ml的范围内，浓度与峰面积呈良好的线性关系，方法平均回收率为98.90%（RSD＝0.50%）。结论  本方法简单、高效、耐用性好。

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【关键词】  高效液相色谱法；醋酸亮丙瑞林；测定

     【Abstract】  Objective  To establish HPLC method for determination of leuprorelin acetate injection.Methods  The column:Diamonsil C18（250mm×4.6mm 5μm）；The mobile phase:Ammonium dihydrogen phosphate solution （dissolve about 11.5g of ammonium dihydrogen phosphate in 950ml of water，adjust to pH 7.0 with ammonia water）-acetonitrile （70:30）；The flow rate:1.0ml/min；The detection wavelength was 220nm.Results  It had a good linearity over the concertration range of 9.66～86.94mg/ml；The average recovery was 98.90% with RSD of 0.50%.Conclusion  This method is simple，rapid and satisfaction.

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    【Key words】  HPLC；leuprorelin acetate；determination

    醋酸亮丙瑞林（Leuprorelin Acetate）是一种人工合成的结构稳定的9肽化合物，是内源性GnRH的高活性衍生物，1985年，美国FDA首次批准亮丙瑞林、利普安（包括日注射制剂与缓释制剂）入市，用于治疗晚期前列腺癌。目前该药主要在临床上用于治疗前列腺癌，同时在治疗儿童中枢性性早熟和女性子宫内膜异位症等疾病也有一定效果。为了能有效地控制本品的质量，本文系统研究了采用HPLC法［1］测定其含量，结果表明该方法可行。

1  仪器与试药

    高效液相色谱仪：Agilent 1100（安捷伦科技开发有限公司）；醋酸亮丙瑞林注射液：批号040501、040502、040503，规格2.8ml:14mg，由扬子江药业集团有限公司生产；亮丙瑞林对照品；批号：lot 093k1628，纯度：100%，肽含量：77%，由SIGMA公司提供；乙腈为色谱纯，水为纯化水，其他试剂均为分析纯。

2  方法与结果

    2.1  色谱条件与系统适用性试验  色谱性Diamonsil钻石C18柱（250mm×4.6mm 5μm）；流动相磷酸二氢铵溶液（取磷酸二氢铵11.5g，加水950mnl，用氨水调节pH值为7.0）-乙腈（70：30）为流动相；流速为1.0ml/min；检测波长为220nm；进样量20μl。理论板数按亮丙瑞林峰计应不低于3000。

    2.2  线性试验  精密称取对照品适量，加流动相溶解稀释制成每1ml含9.66μg、28.98μg、48.30μg、67.62μg、86.94μg的溶液。分别取上述各溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，以亮丙瑞林浓度C对峰面积A进行线性回归，得回归方程为A＝0.5655C+23.332（R2＝0.9996），结果表明，醋酸亮丙瑞林溶液在9.66～86．94μg/ml浓度范围内，浓度与峰面积呈良好的线性关系。

    2.3  空白试验  按处方量配制空白溶液，按上述色谱条件，取20μl注入色谱仪记录色谱图。结果辅料中有较大的色谱峰，其保留时间为6.433min。而主药的保留时间为9min左右。辅料与样品能完全分离，因此辅料不干扰测定。

    2.4  进样精密度  精密称取对照品14.10mg，用流动相溶解稀释制成56.40μg/ml的溶液作为供试品溶液。照上述色谱条件，连续进样5次，记录色谱图。测得峰面积相对标准偏差（RSD%）为0.16%。

    2.5  溶液的稳定性  取一批样品，按2.7项制备供试品溶液。照上述色谱条件，分别在0、2、4、6和8h时取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。测得平均峰面积为58.12（RSD＝0.62%），结果表明，供试品溶液在8h内稳定，满足测定要求。

    2.6  回收率试验  按标示量的80%、100%、120%分别精密称取亮丙瑞林对照品各3份，分别加入处方量的辅料，用流动相制成每1ml约含40μg、50μg、60μg的溶液作为供试品溶液。另取亮丙瑞林对照品适量，同2.7项下制备对照品溶液。分别取供试品溶液与对照品溶液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，结果测得平均回收率为98.90%（RSD＝0.50%），表明该方法回收率良好，辅料不干扰测定。

    2.7  样品的测定  精密量取本品1ml，加流动相稀释制成每1ml中约含50μg的溶液，作为供试品溶液。另精密称取亮丙瑞林对照品适量，加流动相溶解，并定量稀释制成每1ml中约含50μg的溶液，作为对照品溶液。取供试品溶液与对照品溶液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，结果乘以1.050。测定结果见表1。表1  含量测定结果

3  讨论

    3.1  流动相比例的选择  为建立良好的色谱条件，对磷酸二氢铵溶液（取磷酸二氢铵11.5g，加水950ml，用氨水调节pH值为7.0）和乙腈的比例进行了筛选，当二者比例为70：30时，主峰保留时间适中，且主峰与杂质峰分离度较好，满足测定要求。

    3.2  耐用性  采用所选色谱条件，用Diamonsil C18 4.6mm×150mm，5μm色谱柱和Waters C18 4.6mm×150mm，5μm色谱柱进行了相同试验，结果使用不同品牌的色谱柱均能得到较好的色谱峰，表明本方法耐用性良好，符合测定要求。

    【参考文献】

    1  国家药典委员会.中国药典，2000年版.北京：化学工业出版社，2000，2部.

     作者单位： 225321 江苏泰州，扬子江药业集团药物研究院

　  （编辑：汪  洋）