第1题【12山东】除了高温加热以外，其它灭菌方法还有 A．紫外线照射 B．真空包装 C．用保鲜膜密闭 D．添加防腐剂 【解析】此题考查灭菌的方法。灭菌是使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物(包括芽孢和孢子)。本题中真空包装、添加防腐剂、用保鲜膜密闭都起到了抑菌作用，紫外线照射使细菌的蛋白质变性，核酸受破坏，是灭菌方法。 答案 A 第2题【07宁夏】某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察计数。请回答与此实验相关的问题。 （1）培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了___和___。除此之外，培养基还必须含有的基本成分是___和___。 （2）对培养基进行灭菌，应该采用的方法是_______。 （3）为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置于______中培养，培养的温度设定在37℃。要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种______作为对照进行实验。 （4）培养20小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，这说明湖水样品中有_____种细菌。一般说来，菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越_______。 （5）如果提高培养基中NaCl的浓度，可以用于筛选耐_______细菌，这种培养基被称为_____________。 【答案】（1）氮源（碳源不作要求）；碳源；无机盐；水（2）高压蒸汽灭菌（3）恒温培养箱；无菌水（4）多；高（5）盐（或NaCl）；选择性培养基 【解析】（1）培养基的基本成分有氮源、碳源、无机盐和水，蛋白胨可提供氮源、碳源和维生素，淀粉可提供碳源。 （2）对培养基灭菌方法是高压蒸汽灭菌。 （3）恒温培养箱可以为细菌的培养提供一个无菌恒温的环境，以接种无菌水的培养基为空白对照，是为排除培养基的污染。 （4）细菌不同形成的菌落形态和颜色不同，平板上出现形态、颜色不同的菌落说明湖水样品中有多种细菌．污染程度越高污染物越多，适合生长的细菌越多。 （5）能够在NaCl的浓度高的培养基上生长的细菌耐盐能力强，而不耐盐的细菌不能在此培养基上生长，该培养基从功能上来分属于选择培养基。 第3题【12海南】回答下列关于腐乳制作的问题： (1)腐乳是豆腐经微生物发酵后制成的食品。多种微生物参与了该发酵过程，其中起主要作用的微生物是_______，其产生的蛋白酶可将豆腐中的蛋白质水解为_______和_______；其产生的________能将豆腐中的脂肪水解为_______和_______。 (2)发酵完成后需加盐腌制，加盐还可以抑制________生长。 (3)腐乳制作的后期可加入由酒和多种香辛料配置而成的卤汤。卤汤除具有一定的防腐作用外，还能使腐乳具有独特的_____。 【解析】(1)腐乳制作发酵过程中起作用的微生物有多种，如青霉、酵母、曲霉、毛霉等，其中起主要作用的是毛霉，毛霉产生的蛋白酶可将豆腐中的蛋白质水解成多肽和氨基酸，产生的脂肪酶能够将豆腐中的脂肪水解为甘油和脂肪酸。 (2)发酵过程中加盐腌制，不仅可以调制风味，而且能够抑制杂菌等其他微生物的生长。 (3)腐乳制作后期加入卤汤，卤汤不仅可以防腐，还可以使腐乳具有独特的风味(或香味)。 【答案】（1）毛霉(多)肽氨基酸脂肪酶甘油脂肪酸（2）微生物（3）风味 第4题【14海南】已知泡菜中亚硝酸盐含量与泡制时间有关。为了测定不同泡制天数泡菜中亚硝酸盐的含量，某同学设计了一个实验，实验材料、试剂及用具包括：刻度移液管、比色管、不同浓度的亚硝酸钠标准溶液、亚硝酸盐的显色剂、不同泡制天数的泡菜滤液等。回答相关问题： （1）请完善下列实验步骤： ①标准管的制备：用_____________和显色剂制成颜色深浅不同的系列标准管。 ②样品管的制备：用刻度移液管分别吸取一定量的_______________，加到不同的比色管中，然后在各个比色管中加入等量的显色剂进行显色，得到样品管。 ③将每个________分别与系列标准管进行比较，找出与样品管颜色深浅________的标准管，该管中亚硝酸钠含量即代表样品管中亚硝酸盐含量，记录各样品管亚硝酸盐的含量。 （2）下图表示的是泡菜中______________________趋势。
【答案】（1）①亚硝酸钠标准溶液②不同泡制天数的泡菜滤液③样品管最相近（2）亚硝酸盐含量随泡制时间的变化（3）乳酸菌 【解析】本题考查传统发酵技术、实验设计与探究。 （1）①在亚硝酸盐的含量测定中，需用不同浓度亚硝酸钠溶液和显色剂制备具有颜色梯度变化的标准显色液。②用刻度移液管分别吸取一定量的利用不同泡制天数的泡菜制备的滤液加到不同的比色管中，然后在各个比色管中加入等量的显色剂进行显色，得到样品管；观察各组样品管的颜色变化，并与标准显色管进行对比，找出与样品管颜色最相近的一组，其对应的亚硝酸钠含量即代表样品管亚硝酸盐的含量。 （1）据图可知，该图表示亚硝酸盐的含量随发酵时间的变化趋势。 （2）泡菜制作过程产生的乳酸来自于乳酸菌 第5题【14新课标】（15分）植物秸秆中的纤维素可被某些微生物分解。回答下列问题: （1）分解秸秆中纤维素的微生物能分泌纤维素酶，该酶是由3种组分组成的复合酶，其中的葡萄糖苷酶可将_______分解成________。 （2）在含纤维素的培养基中加入刚果红（CR）时，CR可与纤维素形成______色复合物。用含有CR的该种培养基培养纤维素分解菌时，培养基上会出现以该菌的菌落为中心的_______。 （3）为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落，某同学设计了甲、乙两种培养基（成分见下表）：
注：“+”表示有，“-”表示无。 据表判断，培养基甲_____（填“能”或“不能”）用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是______；培养基乙______（填“能”或“不能”）用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是______。 【答案】（1）纤维二糖；葡萄糖（2）红；透明圈（3）不能；液体培养基不能用于分离单菌落；不能；培养基中没有纤维素，不会形成CR-纤维素红色复合物，即使出现单菌落也不能确定其为纤维素分解菌 【解析】（1）纤维素是一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物，是含量最丰富的多糖类物质。纤维素能被土壤中某些微生物分解利用。 （2）刚果红与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，红色复合物无法形成，出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，我们可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。 （3）分离和鉴别纤维素分解菌的培养基位固体培养基，且需以纤维素为唯一碳源。 第6题【14新课标】为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌分离等工作。回答下列问题： （1）该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白干板先行培养了一段时间，这样做的目的是______；然后，将1 mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1 mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。据此可得出每升水样中的活菌数为________。 （2）该小组采用平板划线法分离水样中的细菌。操作时，接种环通过_____灭菌，在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的是________。 （3）示意图A和B中，________表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。
【答案】（1）检测培养基平板灭菌是否合格；3.8×107 （2）灼烧；将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落 （3）B （4）溶解氧；营养物质 【解析】涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，如果灭菌不合格，可在空白平板上发现菌落，所以用此法可检测培养基平板灭菌是否合格。每升水样中的活菌数为（39+38+37）/3=38，再除以0.1乘以100，这是1毫升的菌数量，再乘以1000就是1升中的菌数，故为3.8×107。用平板划线法先用灼烧灭菌再划线。振荡培养可使培养基中各营养分配的均匀和溶氧量大，所以菌的生长也快。 第7题【14四川】有机农药苯磺隆是一种除草剂，长期使用会污染环境。研究发现，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解。分离降解苯磺隆的菌株和探索其降解机制的实验过程如图甲、乙所示。
（1）微生物生长繁殖所需的主要营养物质有碳源、水、______四类，该实验所用的选择培养基只能以苯磺隆作为唯一碳源，其原因是________。 （2）与微生物培养基相比，植物组织培养的培养基常需添加生长素和_______，这些植物激素一般需要事先单独配制成________保存备用。 （3）纯化菌株时，通常使用的划线工具是_______。划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌，第二划线区域所划的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有_________。 （4）为探究苯磺隆的降解机制，将该菌种的培养液过滤离心，取上清液做图乙所示实验。该实验的假设是_______，该实验设计是否合理？为什么？_________。 【答案】（1）氮源和无机盐只有能利用苯磺隆的微生物能正常生长和繁殖 （2）细胞分裂素母液 （3）接种环①接种环灼烧后未冷却；②划线未从第一区域末端开始 （4）目的菌株能分泌降解苯磺隆的蛋白质。不合理，缺少空白对照 【解析】（1）微生物生长所需要的主要营养物质包括：碳源、氮源、水和无机盐。使用选择培养基是因为他是允许特定的微生物生长，同时又能抑制或阻止其他微生物的生长的培养基。 （2）植物组织培养常需要添加的植物激素有生长素和细胞分裂素。MS培养基的成份一般先分别配制成母液备用。 （3）平板划线法接种时常使用接种环划线。第二区域只有第一条线无菌落，而其他的划线却有菌落，很可能是因为接环在灼烧后末冷却，第一次划线时将菌种烫死，而后接种环冷却，能正常划线，也可能是第一次划线时划线未从第一区域末端开始，使接种环上无菌种。 （4）题中实验为取得菌种培养液过滤后离心上清液，加入蛋白酶处理后，测得其对苯磺隆的降解率。意为假设菌种能产生降解苯磺隆的蛋白质类酶，若用蛋白酶处理后，可使该酶分解，苯磺隆降解率下降，则假设成立。但由于缺乏空白对照，不能比较蛋白酶是处理是否降低苯磺隆降解率，该实验不能得出相应结论。 第8题【13新课标1】回答下列有关泡菜制作的习题： （1）制作泡菜是，所用盐水煮沸，其目的是__________。为了缩短制作时间，有人还会在冷却后的盐水中加入少量陈泡菜液，加入陈泡菜液的目的是________。 （2）泡菜制作过程中，乳酸发酵过程即为乳酸菌进行_______的过程。该过程发生在乳酸菌的_______中。 （3）泡菜制作过程中影响亚硝酸盐含量的因素有________、________和________等。 （4）从开始制作到泡菜质量最佳这段时间内，泡菜液逐渐变酸，这段时间内泡菜坛中乳酸菌和其他杂菌的消长规律是_________，原因是：___________。 【答案】（1）消灭杂菌增加乳酸菌含量（2）无氧呼吸细胞质（3）温度、食盐用量、腌制时间（4）乳酸菌数量增加，杂菌数量较少乳酸菌比杂菌更为耐酸 【解析】（1）盐水中可能含有杂菌，制作泡菜时，所用盐水需要煮沸，以便杀死盐水中的杂菌。陈泡菜中含有现成的乳酸菌，加入后，可以缩短制作时间。 （2）乳酸发酵的过程即为乳酸菌进行无氧呼吸的过程。该过程发生在乳酸菌细胞的细胞质基质中。 （3）都泡菜的制作过程中，影响亚硝酸盐含量的因素有温度过高、食盐用量不足、腌制时间等。 （4）从开始制作到泡菜品质最佳这段时间内，泡菜液逐渐发酸，这段时间内泡菜坛中乳酸菌数量增加，其他杂菌较少；原因是酸性条件下，不利于杂菌生存，增加乳酸菌的数量。 【试题点评】本题通过考查泡菜制作的相关基础知识，主要考查识记能力和对相关知识的判断能力。 第9题【13课标Ⅱ】临床使用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验。实验时，首先要从病人身上获取少量样本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。 回答下列问题： （1）为了从样本中获取致病菌单菌落，可用________法或________法将样本接种于固体培养基表面，经过选择培养、鉴别等步骤获得。 （2）取该单菌落适当稀释，用________法接种于固体培养基表面，在37℃培养箱中培养24 h，使其均匀生长，布满平板。 （3）为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性，将分别含有A、B、C、D四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置，培养一段时间后，含A的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素A________；含B的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素B________；含C的滤纸片周围的透明圈比含A的小，说明________；含D的滤纸片周围的透明圈也比含A的小，且透明圈中出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是抗生素D的________。 （4）根据上述实验结果，为达到抗菌目的，最好应选用抗生素________。 【解析】本题主要考查微生物培养的相关知识。(1)将细菌接种到固体培养基上的方法有平板划线法和稀释涂布平板法。(2)由(1)获取的致病菌单菌落，经过适当稀释，用涂布法接种至固体培养基表面进一步培养。(3)在检测致病菌对抗生素的敏感性实验中，若含A种抗生素的滤纸片周围出现透明圈，说明周围的致病菌死亡，该致病菌对A种抗生素敏感；若含B种抗生素的滤纸片周围没有出现透明圈，说明致病菌对B种抗生素不敏感；若含C种抗生素的滤纸片周围的透明圈比含A的小，说明该致病菌对C的敏感性比对A的弱；若含D种抗生素的滤纸片周围透明圈也比含A的小，说明A、B、C、D四种抗生素的杀菌效果最显著的为A。透明圈中出现的菌落为耐药菌。(4)根据(3)中分析，为达到抗菌目的最好选用抗生素A。 【答案】(1)划线稀释涂布(或涂布)(2)涂布(3)敏感不敏感该致病菌对C的敏感性比对A的弱耐药菌(4)A 第10题【12浙江自选】幽门螺杆菌(Hp)感染是急慢性胃炎和消化性溃疡的主要致病因素。在患者体内采集样本并制成菌液后，进行分离培养。实验基本步骤如下：
（1）在配制培养基时，要加入尿素和酚红指示剂，这是因为Hp含有①________，它能以尿素作为氮源；若有Hp，则菌落周围会出现②________色环带。 （2）下列对尿素溶液进行灭菌的最适方法是③____灭菌。 A．高压蒸汽 B．紫外灯照射 C．70%酒精浸泡 D．过滤 （3）步骤X表示④________。在无菌条件下操作时，先将菌液稀释，然后将菌液⑤________到培养基平面上。菌液稀释的目的是为了获得⑥________菌落。 （4）在培养时，需将培养皿倒置并放在⑦________中。若不倒置培养，将导致⑧________。 （5）临床上用14C呼气试验检测人体是否感染Hp，其基本原理是Hp能将14C标记的⑨________分解为NH3和14CO2。 【解析】此题考查微生物的分离与培养知识。(1)幽门螺杆菌(Hp)含有脲酶，能以尿素为氮源，在加入尿素和酚红指示剂的培养基中培养Hp，由于尿素经脲酶的降解可产生碱性的NH3，NH3能使培养基中的酚红由红黄色变成红色，故菌落周围会出现红色环带。(2)由于尿素加热会分解，对尿素溶液进行灭菌最好用G6玻璃砂漏斗过滤。(3)微生物的分离和培养步骤是：配制培养基→灭菌、倒平板→接种→培养。为获得单菌落，接种操作前应先将菌液稀释，然后将菌液涂布到培养基平面上即可。(4)微生物培养时需将培养皿倒置并放在恒温培养箱中，若不倒置培养，则无法形成单菌落。(5)幽门螺杆菌能将14C标记的尿素分解为NH3和14CO2，故临床上常用14C呼气试验检测人体内幽门螺杆菌的存在。 【答案】（1）脲酶红（2）D（3）接种涂布单（4）恒温培养箱无法形成单菌落（5）尿素 |
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