给你策一篇自噬相关的4分多的文献

自噬是一个吞噬自身细胞质蛋白或细胞器并使其包被进入囊泡，并与溶酶体融合形成自噬溶酶体，降解其所包裹的内容物的过程，大隅良典也靠着自噬获得了诺奖。

所以，今天要给你讲的这篇文章，其实跟自噬没什么特别大的关系，讲的是个自噬调控分子。这篇文章发表在Cellular Signalling上（IF=4.191），上了4分的文献告诉你蛋白互作要怎么做。

首先要给你灌输的一个柯霍氏法则，啥是柯霍氏法则?其实简单点说，去掉了某个因素之后，原有的功能丧失，就可以证明这个因素是实现这个功能的关键。

啥？没懂？

好的，给你讲个故事，你就明白了。从前有个专家，做了个实验，他拿了一只蜘蛛放桌子上，他叫了一声“跳！”，然后蜘蛛跳了一下。接着他把蜘蛛的腿都卸掉了，又叫了一声“跳！”，然后蜘蛛动也没动。于是他记录道：蜘蛛的耳朵长在腿上。没毛病……

好了，看完这个，你对柯霍氏法则是不是有了个概念？

那我们接着看这篇文章哈（警告，以下部分速读太快，请系好安全带，并点击下面的“发车”，然后观看，会让你有超速、压线、逆行的快感）：

发车

来自实验万事屋

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摘要部分，我就截取了这么一段，告诉你他们大概做了撒花，一共是三大块：1）共定位；2）蛋白互作；3）凋亡表型。

那他们用了什么样的实验来证明呢？我帮你们总结了一下，大致来说，做了上面这些实验，主要也是为了摘要中的三大块服务的。

接着我们可以看到共定位部分，两个蛋白要相互作用，肯定要共定位一下。起码这俩蛋白需要在一起出现，才能相识相恋相爱是吧，总不能在文章里说这俩蛋白通过粒子纠缠式的网恋，完全是柏拉图式的爱情。但边上为啥要做突变？呃，很简单，还记得刚才的蜘蛛腿么？A蛋白只能抓住B蛋白的腿，但是把B蛋白的腿卸了，A蛋白就注定孤独一生了。

接着他们做的是Co-IP实验，有的人可能不知道啥是Co-IP，那首先我们要简单讲一下IP，这个比较简单，就是先在A蛋白上加上一个标签，然后用抗体去拽这个标签，把A蛋白吸在一个大球上，因为A蛋白能和B蛋白结合啊，那B蛋白势必也会被拉下来，这就是IP。那Co-IP呢？其实就是反过来在用B蛋白拉一遍A蛋白，这两个IP合在一起，就被称为Co-IP。

接着是Pulldown，其实原理跟IP差不多，IP是互相拉过表达的蛋白，Pulldown就是拉内源性的细胞自身表达出来的蛋白了。接着还是刚才的蜘蛛腿实验，证明一下突变后，互作变弱了。

说了半天，终于要到表型了，一个是凋亡表型，一个是自噬表型，这里全部先由明星分子代替了。可以看见作为自噬促进剂的TMEM47可以有效抑制凋亡。

最后用流式再验证了一下凋亡表型，这个时候可以证明的是TMEM47可以抑制凋亡，但这和BIK有啥关系呢？于是把刚才论证过的TMEM47或BIK突变后两者互作变弱，就做了一下这样的验证，分别突变这俩蛋白后，凋亡表型的变化是什么。然后发现，确实变弱了，于是证明TMEM47通过和BIK的互作，抑制细胞凋亡。

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