非小细胞肺癌中EGFR、HER

非小细胞肺癌中EGFR、HER-2、EphA2蛋白表达的意义

邵伟伟*，兰建云，宋　曙，陈海涛，邹　琳

（盐城市第一人民医院病理科，江苏224006）

［摘　　要］目的：探讨EGFR、HER-2、EphA2蛋白在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及临床意义。方法：应用免疫组织化学方法检测70例NSCLC癌组织及10例癌旁组织中EGFR、HER-2、EphA2蛋白的表达。结果：（1）EGFR、HER-2、EphA2蛋白在癌组织中的阳性表达率分别为54.29%，60.00%，57.14%，明显高于癌旁肺组织的0%，0%，20.00%，χ2值和P值分别为χ2=10.3401，P=0.001；χ2=12.6316，P=0.000；χ2=9.4659，P=0.028。（2）EGFR、HER-2蛋白在癌组织中的表达与肿瘤的分化程度、临床分期、大小、组织学类型、有无淋巴结转移及胸膜浸润有关（P均＜0.05），而与患者年龄、性别、是否吸烟无关（P＞0.05）。EphA2的表达与肿瘤的分化程度、临床分期、大小、有无淋巴结转移及胸膜浸润有关（P均＜0.05），而与患者年龄、性别、是否吸烟及组织学类型无关（P＞0.05）。（3）EGFR与HER-2、EphA2的表达呈正相关（P＜0.05）。结论：EGFR、HER-2、EphA2三者共同参与NSCLC的发生、发展、侵袭过程，且3个指标表达具有协同作用。

［关键词］EGFR；HER-2；EphA2；非小细胞肺癌；临床病理因素

工业社会发展至今大气污染越来越严重，再加上人口老龄化、吸烟（主动及被动）等因素的影响，原发性肺癌已居我国恶性肿瘤的首位，其中80%是非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）［1］。表皮生长因子受体（EGFR）和人表皮生长因子受体2（HER-2）同属于表皮生长因子家族，两者都具有酪氨酸激酶的活性，与相应配体结合后可参与恶性肿瘤细胞的增殖、迁移和转移等过程。EphA2是酪氨酸激酶受体亚家族中的一员，正常表达时可以维持细胞骨架的稳定，过表达时可导致肿瘤的形成。本研究通过对70例原发性NSCLC患者的病理组织标本进行上述三项指标进行检测，探讨它们在NSCLC中表达的意义。

1　资料与方法

1.1　一般资料　　选取2013年1月—2015年12月我院手术切除的原发性NSCLC癌组织标本70例，其中男性44例，女性26例，年龄41～78岁，中位年龄56岁，鳞癌21例，腺癌49例。术前均未接受过放化疗。采用中性甲醛固定切取的组织，常规技术处理后行病理诊断，明确组织类型及临床分期。取10例癌周相对正常的肺组织作为对照组。

1.2　检测试剂　　即用型EGFR、HER-2兔抗人单克隆抗体、SP试剂盒（北京中杉金桥生物技术有限公司），浓缩型EphA2鼠抗人单克隆抗体（武汉博士德生物工程有限公司）。

1.3　免疫组织化学法检测　　对石蜡切片进行常规脱蜡水化，免疫组化染色SP法按说明书操作步骤进行。PBS代替一抗处理的切片作为阴性对照片，已知阳性片作为阳性对照。根据欧美实验室标准［2］，HER-2阳性染色定位于细胞膜上，呈棕黄色或棕褐色颗粒，无细胞膜着色为（-），阳性细胞数＞10%且细胞膜为非连续完整着色为（+），阳性细胞数＞10%且细胞膜为中等强度连续完整着色为（++），阳性细胞数＞10%且细胞膜为强而连续完整着色为（+++）。本研究将HER-2（-）及（+）计为阴性组，（++）及（+++）

计为阳性组。EGFR阳性染色定位于细胞膜上，呈棕黄或棕褐色颗粒，EphA2阳性染色定位于细胞质或细胞膜上，呈棕黄色颗粒。采用双评分半定量法判断［3］：EGFR阳性细胞数＜5%为0分，6%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，＞75%为4分；EphA2无染色为0分，轻度着色为1分，中度着色为2分，重度着色为3分。两种计分标准之和≥4分为阳性，＜4分为阴性。

1.4　统计学处理　应用SPSS11.5统计软件对相关数据进行处理和分析。率的比较采用χ2检验和Fisher-exact检验，采用Spearman等级相关分析两指标间的关系。检验水准均采用α=0.05。

2　结　果

2.1　EGFR、HER-2、EphA2蛋白在癌组织和癌旁组织中的表达　EGFR、HER-2阳性均表达在癌细胞膜上（图1、2），EphA2阳性表达在癌细胞浆和膜上（图3）。70例NSCLC癌组织中，EGFR、HER-2、EphA2蛋白阳性表达率分别为 54.29%，60.00%，57.14%，作为对照的癌旁组织三者的阳性表达率分别为0%，0%，20.00%，两组间的差异有统计学意义。χ2值和P值分别为χ2=10.3401，P=0.001；χ2=12.6316，P=0.000；χ2=9.4659，P= 0.028。见表1。

图1　EGFR表达在肺腺癌的细胞膜（400×）

表1　EGFR、HER-2、EphA2蛋白在癌组织与癌旁组织中的表达　　例

组别　EGFR　HER-2　EphA2 -　+P值　-　+P值　-　+P值癌旁组织　10　0　0.00110　0　0.000　8　2　0.028癌组织　3238　2842　3040

2.2　EGFR、HER-2、EphA2蛋白的表达与临床病理因素间的关系　EGFR、HER-2蛋白的表达均与肿瘤分化程度、大小、临床分期、组织学类型、有无胸膜及淋巴结转移有关（P＜0.05），与患者性别、年龄、有无吸烟无关（P＞0.05）；EphA2的表达与肿瘤的分化程度、大小、临床分期、有无胸膜及淋巴结转移有关（P＜0.05），与患者性别、年龄、有无吸烟及组织学类型无关（P＞0.05）。见表2。

图2　HER-2表达在肺腺癌的细胞膜（400×）

图3　EphA2表达在肺鳞癌的胞浆和胞膜上（400×）

2.3　EGFR、HER-2、EphA2表达的相关性　EGFR与HER-2、EphA2在癌组织中的表达均有相关性（χ2=4.2311，P=0.040；χ2=4.3174，P=0.038），且均呈正相关（χ2=0.2459，P=0.0402；χ2=0.2483，P=0.0382），见表3。

表2　EGFR、HER-2、EphA2蛋白表达与临床病理因素的关系　　例

例数　EGFR　HER-2　EphA2 -　+　P值　-　+　P值　-　+　P值性别　　男　44　20　24　0.955　18　26　0.840　18　26　0.668女　26　12　14　10　16　12　14年龄　　≤56　29　12　17　0.540　11　18　0.766　15　14　0.207＞56　41　20　21　17　24　15　26吸烟　　无　42　17　25　0.281　16　26　0.690　14　28　0.242有　28　15　13　12　16　16　12分化　　高　2013　7　12　8　11　9中　26　13　13　0.025　12　14　0.010　14　12　0.027低　24　6　18　4　20　5　19肿块大小　　＜3cm　31　20　11　0.005　17　14　0.024　21　10　0.000＞3cm　39　12　27　11　28　9　30 TNM分期　Ⅰ期　10　7　3　8　2　7　3Ⅱ期　19　12　7　0.043　9　10　0.015　11　8　0.048Ⅲ期　33　11　22　8　25　10　23Ⅳ期826　35　26淋巴结转移　无　42　24　18　0.019　22　20　0.010　26　16　0.000有　28　8　20　6　22　4　24组织学类型　鳞癌　21　14　7　0.021　13　8　0.014　8　13　0.598腺癌　49　18　31　15　34　22　27胸膜浸润　　无　45　25　20　0.027　23　22　0.011　24　21　0.017有　25　7　18　5　20　6　19

表3　EGFR、HER-2、EphA2在癌组织中表达的相关性　　例

EGFR　HER-2　EphA2 -　+　P值　-　+　P值-　17　15　0.0402　18　14　0.0382 +　11　27　12　26

3　讨　论

肺癌5年总生存率不足15%，传统的手术、放化疗对患者预后未有明显改善［4］，因而针对其发生、发展、侵袭过程中涉及的细胞传导通路中的一些分子成为研究的热点。EGFR属于酪氨酸激酶型受体，正常情况下以无活性状态存在，一旦被激活可导致肿瘤细胞内酪氨酸蛋白激酶活化和自身磷酸化，从而促使细胞增生、分化、转移等［5］。本研究发现EGFR在正常肺组织无表达，在癌组织中随着肿块体积增大，分化程度降低，TNM分期增高其表达显著增高。原因可能是与正常肺组织相比，癌组织中EGFR的配体EGF数量较多，两者结合后形成同源二聚体，一方面通过激活酪氨酸蛋白激酶继而启动细胞内的信号转导通路，激活细胞核内的多种转录因子，引起细胞的恶性增殖、抗凋亡能力增强，另一方面形成的二聚体不容易被清除继而造成堆积，导致恶性循环。在有淋巴结转移及胸膜侵犯的组织中EGFR的表达也是增高的，提示EGFR可能有诱导肿瘤血管形成的作用，加上肿瘤细胞间粘附能力的下降有利于细胞的转移。

HER-2是人体内重要的原癌基因之一，其高表达与癌细胞的增殖、迁移、转移、抗凋亡和血管生成有关［6］，已有报道在多种实体肿瘤中存在HER-2的过表达［7-8］。本研究发现在NSCLC癌组织中HER-2阳性表达率为60.00%，较正常肺组织高，差异有统计学意义，且随着肿瘤分化程度降低、临床分期较晚、体积较大、淋巴结转移及胸膜浸润，其表达率随之增高。原因可能是HER-2蛋白作为原癌基因在正常情况下处于非激活的状态，但是它所编码的跨膜糖蛋白是一种具有酪氨酸激酶活性的细胞膜受体，受到致癌因素作用时其配体数目最多，HER-2与配体结合形成的二聚体数量增多，可激活细胞内酪氨酸激酶磷酸化，从而参与细胞内的信号转导通路，达到调节细胞的恶性增殖和粘附能力。本文同时发现EGFR与HER-2在腺癌中的阳性表达率较鳞状细胞癌高，提示在肺腺癌中两指标可作为评价肿瘤进展的指标。

Eph受体酪氨酸激酶是酪氨酸激酶受体家族中最大的亚族。EphA2是EphA亚家族受体14个成员中的第2个，其正常表达时可以调节细胞的粘附、运动，维持细胞骨架的稳定，而过表达时可导致肿瘤形成，甚至加速肿瘤的侵袭、浸润及转移［9］。本研究结果显示EphA2的表达随着细胞恶性变、癌进展，其表达增高。原因可能是由于当肺泡及支气管上皮细胞发生恶性变时，一方面细胞与细胞外基质之间粘附性下降，EphA2不能与它的配体正常结合，另一方面恶性变时肿瘤细胞之间出现异常粘附，导致EphA2与配体异常定位，这两方面的因素阻碍了EphA2与配体的正常结合，使EphA2不能很好地与下游信号转导蛋白发生反应，从而引起EphA2的聚积，导致肿瘤细胞增殖［10］。

我们通过对70例NSCLC中EGFR、HER-2、EphA2蛋白表达的观察，发现EGFR与HER-2、EphA2的表达呈正相关。可能是由于EGFR与HER-2同属于表皮生长因子家族，在癌组织中两者通过形成异源二聚体激活酪氨酸蛋白激酶，导致细胞的恶性增殖。EphA2作为酪氨酸激酶受体，当EGFR表达加强时上调了EphA2的活性，通过影响细胞内的信号转导通路，两者促进了NSCLC的恶性进展。综上所述，NSCLC中EGFR、HER-2、EphA2三者表达具有协同作用，促进癌的恶性进展，提示三者或许可以作为临床评估NSCLC进展的分子指标。

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［10］邵伟伟，郝兰香，兰建云，等.EphA2、E-钙黏蛋白在非小细胞肺癌中的表达及意义［J］.现代肿瘤医学，2015，23（19）：2761-2763.

To explore the expressions and significance of EGFR，HER-2 and EphA2 in Non-small Cell lung cancer

SHAO Weiwei，LAN Jianyun，SONG Shu，CHEN Haitao，ZOU Lin
（Department of Pathology，The First People's Hospital of Yancheng，Jiangsu 224006）

［Abstract］Objective：To explore the relationship of expressions of EGFR，HER-2 and EphA2 in NSCLC and clinical pathological features.Methods：SP immunohistochemical staining was used to examine the expressions of EGFR，HER-2 and EphA2 in 70 NSCLC specimens and in 10 normal lung tissues.Results：（1）The positive rates of EGFR，HER-2 and EphA2 were significantly higher than those in the normal tissues（χ2=10.3401，P=0.001；χ2=12.6316，P=0.000；χ2=9.4659，P=0.028，respectively）.（2）EGFR and HER-2 expressions were correlated with differential，clinical stage，the size of tumor，histological type，lymph nodes metastasis and pleural invasion（P＜0.05）；but.not correlated with age，sex and the smoking habit（P＞0.05）.EphA2 expression was correlated with differential，clinical stage，the size of tumor lymph nodes metastasis and pleural invasion（P＜0.05）；but not correlated with age，sex，the smoking habit and histological type（P＞0.05）.（3）The expressions of EGFR and HER-2、EphA2 protein were positively correlated with each other（P＜0.05）.Conclusions：EGFR，HER-2 and EphA2 were also promote the non-small cell lung cancer's occurrence，development and transfer；and they played a correlation effection with each other.

［Key words］epidermal growth factor receptor；human epidermal growth factor receptor 2；erythropoietin-producing hepatocellular receptor A2；non-small cell lung cancer；clinical pathological feature

［中图分类号］R734.2　　

［文献标志码］A

［文章编号］1006-2440（2016）04-0311-04

*［作者简介］邵伟伟，女，汉族，江苏盐城人，生于1979年7月，硕士，主治医师。研究方向：神经系统肿瘤病理。

［收稿日期］2016-07-12