|
新年好礼  各位小伙伴们，春节过得好吗？让我们调整状态开始新的学习与成长吧！ 今天，我们聊聊冰冻切片中冰晶的表现形式，产生的原因以及怎样冷冻组织减少冰晶的形成。 病理诊断医生对着一张满视野冰晶的切片，那份内心纠结、连猜带蒙作出病理诊断、午夜梦回心有余悸……。冰晶是影响冰冻切片质量最大的因素。组织内冰晶形成导致细胞收缩，组织细微结构变形。诊断医生知道冰冻切片中的细胞组织形态不对，但不知是什么原因造成。技术员也一脸蒙圈，我是按照技术操作流程做的呀，哪里不对呢？ 岁岁年年冰晶在，大家觉得很无奈…… 冰晶是冰冻制片过程中第一个也是最大的一个坑，冰晶解决之道在哪？万物皆有道，看你知道不知道！ 一、冰晶的表现形式与产生原因 要解决冰晶问题，首先你得先知道冰冻切片中什么样的表现是冰晶。冰冻切片中按照冰晶形成在细胞内外的位置不同，表现形式有细胞外冰晶、细胞质内冰晶、细胞核内冰晶。 （一）细胞外冰晶是什么样子滴？有图有真相，看看冰冻切片对照图：   图1：肾脏组织（左侧切片无冰晶，右侧切片大量细胞外冰晶）   图2：乳腺组织冰冻切片（左侧切片无冰晶，右侧切片大量细胞外冰晶）   图3：胃粘膜冰冻切片（左侧切片无冰晶，右侧切片大量细胞外冰晶）   图4：子宫肌层与腺体冰冻切片（左侧切片无冰晶，右侧切片大量细胞外冰晶） 在冰冻切片中，细胞外冰晶是冰冻切片中见到最多的一种表现形式，各种组织均可以出现。 出现细胞外冰晶的原因：（1）组织放在速冻台上缓慢冷冻，未用冷冻锤速冻（在上一篇“一个由比赛获奖引发的认知历程”中已经提到）。（2）使用冷冻锤冷冻组织，粗修过深，切片取到了冰晶较多的组织层面。 （二）接下来看看细胞质内冰晶和细胞核内冰晶是什么样子滴？看对照图：   图5：平滑肌胞质内冰晶（左侧肌细胞质内极少冰晶，右侧大量冰晶） 图6：鳞状上皮组织细胞核内冰晶（左侧鳞状上皮核内无冰晶，右侧大量核内冰晶形成） 图7：甲状腺乳头状癌（左侧肿瘤细胞核内无冰晶，右侧大量核内冰晶形成） 胞质内冰晶一般易出现在体积较大胞质丰富的细胞，如肌细胞，肝细胞、胞质丰富的肿瘤细胞等。 细胞核内冰晶一般易出现在细胞核体积较大的细胞，如鳞状上皮细胞、胃肠道腺上皮细胞、核大的肿瘤细胞等。 胞质内冰晶与胞核内冰晶形成的原因：（1）速冻组织的冷冻锤温度不够低（未低于-20℃）；（2）冷冻锤温度足够低，但组织粗修过深；（3）液氮冷冻辅助工具或耗材过厚等因素减缓组织速冻速度；（4）切片过程中用手捂组织进行升温，组织水分冻融后二次结晶，形成大量不规则分布的细胞质内和核内冰晶。 二、减少冰晶形成的组织冷冻流程与操作要点 冰晶出现的原因是组织冷冻速度太慢。所以呢，要想减少冰晶形成，组织冷冻的方式和操作流程至关重要！ 想尽一切办法，以最快的速度冷冻组织是减少冰晶形成的王道！ 本喵根据冰晶形成的原理与实践经验，总结出组织冷冻流程和操作要点，供各位小伙伴们实践参阅： （一）液氮冷冻组织速度非常快，能有效减少冰晶形成。 但因增加技术和管理成本、使用过程安全性不高，存在生物安全问题等因素，所以没有被广泛运用。有条件的亲们可以考虑使用。其他的液体速冻剂也能达到类似于液氮速冻的效果。 （二）冷冻锤是最常用的组织冷冻手段，速冻快，成本低，操作简单。 冷冻锤冷冻组织操作流程： 冷冻锤冷冻操作要点： （1）冰冻切片机速冻台的温度得足够冷。因冷冻锤须放在速冻台上降温。本喵认为速冻台的温度至少应低于-30℃以下。请注意哈，温度显示的数字与实际温度会有差异，特别是在温度感应器出现故障的情况下。冰冻切片机的维护和正常运行监控不是本次学习内容。 （2）冷冻锤要与速冻台“亲密接触”才能达到有效降温。有些品牌的冰冻切片机的冷冻锤是悬挂在箱体里，冷冻锤的温度只能与箱体温度持平 箱体温度一般都设置在-16~-20℃）! 怎么办？想办法让它俩亲密接触喽！ （3）冷冻过组织的冷冻锤，必须将冷冻锤放在速冻台上再次降温后使用（能量守恒的定律大家想必都懂的哈）。 （4）组织放上组织托之后，必须立即压上冷冻锤进行组织冷冻。立刻！！马上！！！如果同时进行多块组织的冷冻，冷冻锤不够用，咋办涅？想办法多配几个冷冻锤喽！原厂冷冻锤不好弄就去找人加工几个（如本喵图片中的冷冻锤），备上3~4个，一次性消费，物美价廉，一劳永逸！流水的冰冻切片机，铁打的冷冻锤。冷冻锤材质建议选择黄铜，导热速度比不锈钢和铝质的快很多。 |
|
|
