HC2阴性子宫颈癌HPV PCR检测及基因分型结果一文解析和评论

宫颈癌是发展中国家第二种最常见的癌症类型。一般认为几乎所有宫颈癌及癌前病变均由持续性高危型HPV（hrHPV）感染所致。在宫颈癌前病变检测中，有研究提示液基hrHPV检测较宫颈细胞学检测具有更高的敏感性，2014年美国食品药品监督管理局（FDA）批准Cobas HPV检测对25岁以上女性可用作宫颈癌一线筛查。

许多研究发现部分宫颈癌患者细胞学样本hrHPV检测阴性（范围10%-30%）。美国CAP最近一项由多个医学中心参与的研究发现，组织学确诊为宫颈癌之前，HPV在1年内、1-3年以及3-5年的阴性率分别为9%、23%、25%。此外，美国Quest诊断公司的研究也显示，526例浸润性宫颈癌患者1年内HPV检测阴性率为19%。中国复旦大学妇产科医院、广州金域医学检验中心和中日友好医院发表的研究资料同样表明，浸润性宫颈癌患者组织学诊断前几个月宫颈细胞学样本HC2检测的阴性率分别为15.5%、7.5%和9.8%。

最近美国匹兹堡大学赵澄泉教授和复旦妇产科医院陶祥、周先荣主任；广州金域郑保文、曾征宇；青岛大学医学院殷复粉和罗兵教授；美国俄侅俄州立大学李再波以及埃默里大学Griffith医生等对HC2阴性的宫颈癌组织标本用分子生物学方法进行了HPV检测，论文于2017年3月15日提前在线发表于《美国临床病理学杂志》[1]，本文对此论文进行解析和评论。

一、

材料和方法

基于先前在复旦大学妇产科医院和广州金域医学检验中心的一组研究，他们所选取的研究对象为组织学确诊前1年内细胞学样本HC2 hrHPV检测阴性的宫颈癌病例，共计61例，包括鳞状细胞癌50例、腺癌8例（普通型腺癌5例、微偏腺癌2例及透明细胞癌1例）、以及腺鳞癌3例。患者平均年龄47岁（年龄范围27-78岁）。细胞学样本hrHPV检测阴性到组织学确诊为宫颈癌的平均间期为1.8个月（0.2-12月）。

使用QIAamp DNA FFPE 组织试剂盒（Qiagen GmbH, Hilden, Germany）提取DNA ，PCR法 HPV DNA 检测与HPV基因分型检测分别在青岛大学医学院和广州金域2个实验室进行。HPV PCR检测采用了病毒基因组L1不同区域的三组共用引物（GP5+/6+、MY09/11和SPF1/2），HPV基因分型应用Rochelinear array (LA)检测试剂盒（Roche Molecular Diagnostics），该方法可以检测37种不同HPV基因型。

二、

研究结果

1. 61例宫颈癌样本HPV DNA PCR检测中，GP5+/6+引物组阳性率为32.8%

（20/61），MY09/11引物组阳性率为36.1%（22/61），SPF1/2引物组阳性率为36.1%（22/61）；总体来看，所有三组引物均为阳性有17例（27.9%）；三组PCR引物中至少有一组可以检测到HPV DNA的有27例（44.3%），3组引物PCR产物电泳结果见图1。

图1  HPV PCR产物电泳图

2. 61例宫颈癌样本Roche LA HPV基因分型检测结果：27例（44.3%）呈阳性(表1)。

综合PCR和HPV 基因分型方法， 61例样本中HPV阳性28例（45.9%）。共包含7种不同HPV基因型，最常见为HPV16。

注：1例为HPV26和HPV58同时阳性。

 

3. 按照组织学类型分类，鳞状细胞癌HPV DNA检出率为50%（25/50），余见表2。

4. 这61例有HPV检测阴性史的浸润性宫颈癌患者中，44例在组织学确诊之前的1年内有宫颈细胞学检测结果，见表3。需要注意的是，宫颈细胞学检测和HC2 HPV检测结果均为阴性的7例组织样本中，3例HPV DNA检测呈阳性。

 

5. 8例浸润性宫颈腺癌宫颈细胞学检测结果以及细胞学样本、组织样本HPV检测结果见表4。2例微偏腺癌及1例透明细胞癌HPV DNA检测均为阴性，5例HC2阴性的普通型宫颈腺癌在宫颈细胞学检测中3例判读为AGC，仅有1例组织样本HPV DNA检测呈阳性。

三、

评论

1. 此项研究是首次对HC2 HPV检查阴性的宫颈癌患者组织标本进行HPV分子学检测。61例组织学样本中28例（45.9%）HPV DNA检测呈阳性，在这组特殊选择的人群中HPV16仍然是最常见的HPV基因型。

2. 宫颈癌筛查hrHPV检测阴性的原因包括多种，例如低病毒载量、筛查间期宫颈癌进展迅速、以及无HPV感染。这些细胞学样本HPV检测出现的“假阴性”（即：细胞学样本HC2阴性而癌组织样本阳性）可能提示细胞学样本HPV检测的局限性，例如低于HC2检测的低病毒载量和妇科医生取材不足。

3. 本研究结果表明细胞学HC2检测“真阴性”（即：细胞学样本HC2和癌组织学样本均阴性）病例占54%。这也提示这些宫颈癌的发生可能与HPV感染无关，所以即使用最敏感的HPV检测方法作为单一宫颈癌筛查手段也会遗漏这些病人，延误治疗。

4. 就宫颈癌组织学类型而言，宫颈腺癌患者细胞学样本HPV阴性率要高于鳞状细胞癌或腺鳞癌。宫颈腺癌较高HPV阴性率的潜在因素包括：宫颈腺癌更常为局灶性和/或位于宫颈管较高位置而更加不容易采样。另外相当部分宫颈腺癌可能与HPV感染无关，因此HPV检测不会发现这些病例，特别是腺癌的一些特殊亚型。美国≤现代病理学≥杂志2014年发表一组最大宗宫颈腺癌组织标本（760例）HPV检测研究，结果普通型宫颈腺癌HPV阳型率为71.8%，但是在一些特殊亚型病例中阳性率则大幅降低。美国和欧洲国家的资料表明宫颈腺癌在所有宫颈癌中所占比例在过去10年中大幅增加（20~30%），所以如果以HPV检查作为一线筛查，势必漏诊更多的宫颈腺癌患者。虽然宫颈腺癌细胞学筛查的阴性率也很高，但本项研究显示HC2 HPV阴性的腺癌病例中，50%患者的宫颈组织学检查为AGC，所以仅从提高敏感性而言，细胞学和HPV共同检测应为最佳的宫颈癌筛查方案。

[1] Tao X, Zheng B, Yin F, Zeng Z, Li Z, Griffith CC, Luo B, Ding X,Zhou X, Zhao C. Polymerase Chain Reaction Human Papillomavirus (HPV) Detectionand HPV Genotyping in Invasive Cervical Cancers With Prior Negative HC2 TestResults. Am J Clin Pathol. 2017 Mar 15. doi: 10.1093/ajcp/aqx027. [Epub aheadof print]

 

编译：汪  俊（香港大学深圳医院）；王巍伟 （山东省诸城市妇幼保健院）

审阅及评论：赵澄泉（美国匹兹堡大学医学院）；李晓（杭州市第一人民医院）      

 

中国妇产科网征稿启事