【原创】生化检验异常反应曲线解析----底物耗尽

在审报告单时，是否出现过这种情况，即肝功其他指标异常，肝损伤严重，而转氨酶（如ALT、AST）测值反倒正常，把该病人标本稀释后测定，转氨酶则很高，远远超过线性范围。

那么这种现象我们要查看标本反应曲线，确定是否出现底物耗尽。

强调说明下，底物耗尽只有速率法会出现这种情况（包含速率法A和两点速率法）。

下图为酶动力学反应曲线：

在零级反应期，底物过量，酶催化底物活性达到最大，吸光度变化速度恒定，单位时间内的吸光度变化值才与酶活性成正比。

正常应该是这样，吸光度读数点均在零级反应期内。

当样本中酶的活性远超过试剂盒提供的线性范围时，零级反应期非常短，不能有效的完成速率法检测，此为底物耗尽。常见的有三种情况：

1、样本中酶的活性远超线性范围，底物几乎是瞬间被耗尽，零级反应期极短，设定的常规吸光度读数点完全不在零级反应期内，即反应界限内的吸光度点数零，此时甚至可能会测出负值（很容易就能发现）；

2、样本中酶的活性超过线性范围较多，底物在较短时间内是被耗尽，零级反应期较短，设定的常规吸光度读数点大部分不在零级反应期内，此时会造成结果严重偏低（不易发现，故可能导致严重后果）；

如下图，

红色的是读数点，可以看到读数点完全不在零级反应期内

3、样本中酶的活性超过线性范围并不多，底物耗尽需要相当的时间，零级反应期相对上述两种情况要长，设定的常规吸光度读数点仅有小部分不在零级反应期内，此时依然会造成结果偏低但没有2那么严重（不易发现，也不会太严重）。

底物耗尽参数如何设置

如下图为日立全自动生化分析仪7180参数设置界面

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如果是下降反应，建议Abs.Limit设置为4500（经验值，不同项目会存在差异），如果测光点范围内吸光度低于4500（会再加上样本与试剂产生的背景吸光度），则不用于结果计算。

如果是上升反应，建议建议Abs.Limit设置为25000，如果测光点范围内吸光度高于25000，会有相应数据报警，

出现底物耗尽解决方法

如果出现底物耗尽，首先把标本稀释后测定；另外在全自动生化分析仪里面设置数据报警拦截，如果该标本出现底物耗尽，则该结果不往LIS里面传输，便于发现异常结果和避免漏检发生。