|
1严格消灭污染源 要确保培养基灭菌彻底，同时应定期清理消毒接种室和培养室，保持环境高度清洁，保证所用容器洁净，培养基及接种器具要彻底灭菌，培养基母液要在冰箱中保存，保持室内干净；对已经被真菌污染的材料要经过高压灭菌后扔掉，即使仅形成菌丝也应该处理后扔掉。 2严格无菌操作 接种室要经常用紫外线灯消毒灭菌，工作人员在进行接种前要换工作服并带口罩，接种前用75%酒精仔细擦手，方可进行下一步工作；同时工作人员在接种过程中要严格按照无菌操作要求进行材料转接，尽量少走动、不说话，以减少空气震动和流动，减少污染。工作台面及台壁也要用75%酒精消毒；接种所用的剪刀和镊子等也要进行彻底的消毒。 3用正确的灭菌方法进行灭菌 对在室外采集回来的马铃薯基础材料或是用马铃薯薯块诱导所得的芽，要先在水龙头下冲洗干净，同时拿柔软的毛刷轻刷表面，最后在超净工作台上进行灭菌处理。对马铃薯基础材料的灭菌材料，一般可以用10%次氯酸钠溶液或0.1%升汞溶液进行灭菌。在植物组织培养中对材料进行的灭菌，采用复合灭菌剂处理比使用单一灭菌剂处理灭菌效果更好。因此，在马铃薯组织培养中，为了增强灭菌效果，可采用混合的消毒液或进行多次消毒，即用10%次氯酸钠溶液灭菌处理2~3min，再用0.1%升汞溶液灭菌处理2~3min，这样可以取得很好的灭菌效果。 4保证用于转接的材料无污染 在马铃薯继代培养过程中，用于扩大繁殖的马铃薯材料本身有无污染是直接影响到接种后污染率高低的关键因素，如果使用了有污染的马铃薯材料转接继代培养则会全部污染。因此，在马铃薯核心种苗的扩繁接种过程中，特别是在转继代培养过程中，对所要转接的马铃薯材料一定要在灯光下仔细观察，确认无污染的材料才能使用。接种前用酒精擦瓶子外壁及瓶盖，防止附在瓶子上的杂菌带入接种室。 5严格接种后的管理 在材料的培养阶段，应定期清理消毒培养室，保持培养室内空气洁净。定期用甲醛溶液、米醋或臭氧机熏蒸培养室，非工作人员应尽量少进入培养室内。一旦发现污染要及时处理：如果是真菌污染，必须对污染的苗用高压锅灭菌后销毁；如果是细菌污染，而且被污染的材料是比较稀少且珍贵的，可以对所污染的材料进行挽救，具体做法是：将被污染的整瓶材料拿出培养室，用酒精棉将污染处盖住，将植株顶部剪下再次进行灭菌处理后转接到干净的培养基中。 6防止内生菌污染 内生菌由于其潜伏得较深，表面消毒往往无法将其消灭。有时在外植体的初级培养中也不易被发现，随着继代次数的增加，菌量慢慢累积发展才在培养基上表现出来。遇到这种情况时可通过在培养基中添加一些抑菌剂或抗生素如青霉素、链霉素等，来防止和减少内生菌的污染。 |
|
|
