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没时间啃文献？跟着解螺旋文献菌读文献，周一到周五每日一篇，篇篇精选，天天有收获！ Discussion写作模板 | SCI作图 | qPCR曲线 | 自噬相关mTOR信号 | ELISA实验 编辑：子非鱼（转载请注：解螺旋·医生科研助手） LncRNA的火热研究已经有几年的时间了，关于lncRNA总归是有说不完的话题。目前对lncRNA的基础分析都已形成了一定的模式（点击“lncRNA的撩妹大招”，查看lncRNA研究套路）。因而，近年来lncRNA的相关文章如井喷之势不断地涌现出来。 全世界和中国的lncRNA研究相关文章的发表状况 可见，截至2015年，我国lncRNA发表文章已占全世界的一半，不过高分文章的比例就显著减少了，4分以上的文章只占到了大约1/3，10分以上的文章也只占到大约1/6左右。 所以尽管lncRNA研究有套路可循，但要冲击lncRNA的高分文章，仍需面临着诸多未知的艰辛。毕竟，套路也只是lncRNA研究的主干道，而沿着这条路往下走，就好像去一个山脉寻宝一样，不同的人会选择去不同的山头，寻到的宝自然也不一样。 而Nature Communication（IF=11.329）的这篇关于lncRNA的ceRNA文章《Lnc-mg is a long non-coding RNA that promotes myogenesis》（回复关键词170324下载文献）除了遵循我们所熟知的套路：lncRNA筛选——功能验证——机制研究外，到底凭借什么占据了lncRNA研究世界的至高点呢？ 原因主要在于以下两点：1）对于筛选到的lncRNA，从体内体外实验，过表达和敲降实验都进行了详细的验证；2）lncRNA机制研究时，通过miRNA芯片筛选，从ceRNA角度进行详细的验证。 这篇文章的主要剧本是挖掘参与肌细胞形成调控的lncRNA。研究者在通过芯片筛选、不同的肌肉组织的表达鉴定以及mRNA的功能富集实验后，最终确定了参演本剧的核心主角——lnc-mg，并深入研究它在肌肉干细胞（MuSCs）分化为肌细胞中所起的作用。 随后，在lnc-mg的功能分析中，研究人员首先进行了lnc-mg的敲降和过表达。结果显示，lnc-mg敲降后，MuSCs的分化受到抑制，其分子标志MyHC表达降低，肌小管数量减少；过表达后，MuSCs分化加强，肌小管数目增加。 此外，研究人员也构建了lnc-mg敲除小鼠模型和转基因lnc-mg的TG小鼠模型，并分别检测腓肠肌（GAS），比目鱼肌（SOL），伸缩肌（EDL）和胫骨前肌的形状变化，结果发现敲除后小鼠的肌肉重量变轻体积变小，而TG小鼠的的肌肉组织却变重变大； 另外，两种小鼠模型的肌肉僵直机能和运动能力也是完全相反的。因而，通过体外和体内实验表明lnc-mg确实是一个影响肌生成的重要lncRNA。 众所周知，通常lncRNA是凭借着七伤拳这种“杀敌一千，自损八百”的作用模式（microRNA可以类似调控靶基因的方式调控lncRNA，而lncRNA又可作为microRNA sponge结合microRNA）而在科研江湖中任意驰骋的。 既然本文已经确定了lnc-mg与肌生成存在千丝万缕的关系，那么ceRNA究竟有没有在其中牵线搭桥，便成为研究者考虑的首选之项。此时，就需要通过对lnc-mg的细胞定位来进行初步判断。 如果lncRNA定位于核内的时候，就暂时不要考虑ceRNA了，但FISH实验结果发现lnc-mg可同时存在于胞质和核内，且在分化的成肌细胞中主要定位于细胞质中。 因而，为了验证lnc-mg是否练就了七伤拳，研究者通过芯片检测了过表达和敲降lnc-mg细胞的miRNA表达变化，并发现miR-125b在过表达细胞中下调，在敲降细胞中上调。生物信息学分析也表明，lnc-mg有miR-125b结合位点。 因此，miR-125b是lnc-mg实现ceRNA机制的潜在靶点。此外，荧光素酶检测结果也证实了lnc-mg能结合miR-125b并能影响其表达。 目前，已有研究显示miR-125b可通过调控靶基因Igf2来影响成肌细胞分化。因此，研究人员也检测了过表达和敲降lnc-mg细胞中Igf2的表达。 其中，western blotting和ELISA结果表明Igf2蛋白表达分别增强和减少，且荧光素酶和小鼠转基因模型实验也都清晰地表明，lnc-mg可通过竞争性地结合miR-125b来影响Igf2的表达进而对肌生成过程起作用。 总而言之，任何一篇针对由芯片或者RNA-seq测序筛选而得到的显著差异表达的lncRNA研究文章，均需要通过后续一系列大量实验，如表达验证、功能验证以及关键的互作验证（研究其作用机理）实验等，来搭成向高分文章晋级的阶梯（见下图）。 因而，只要各位小伙伴们能通过以下实验将lncRNA的身家背景调查的清清楚楚，终会攀爬到别人没有到过的山头，并寻到属于自己独一无二的宝贝，如此还愁发表不了高分文章么？ 参考文献：Lnc-mg is a long non-coding RNA that promotes myogenesis |
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