 导读 首先来看下我们需要筛选的目的细胞，既B细胞和瘤细胞的融合细胞，但在细胞融合的过程中除了B细胞与瘤细胞能融合外，B细胞自身、瘤细胞自身也都能发生融合，另外还有多个B细胞与多个瘤细胞融合的情况（这种细胞不稳定，几乎不能存活)以及未融合的细胞。B细胞和B细胞的自身融合细胞，其仍然不能无限增殖，在体外增殖数代后就会死亡，不足为虑，主要的问题是如何消灭未融合和自身融合的瘤细胞。 核酸合成途径 为了能让大家更好地理解HAT培养基的筛选原理，我们需要回顾下核酸合成的途径，看下图：  核酸合成主要途径 先看嘌呤核苷酸的合成，生物体内先由5-磷酸核糖焦磷酸合成次黄嘌呤核苷酸，次黄嘌呤核苷酸合成后，经氨基化即可形成腺嘌呤核苷酸；经氧化和氨基化即可形成鸟嘌呤核苷酸。再来看嘧啶核苷酸的合成，生物体内先先由氨甲酰磷酸和天冬氨酸合成尿嘧啶核苷酸，然后尿嘧啶核苷酸经磷酸化、氨基化就可形成胞嘧啶核苷三磷酸；在核糖核酸还原酶的还原作用下可形成尿嘧啶脱氧核糖核苷酸，再经过甲基化后可形成胸腺嘧啶核苷酸。这就是体内核酸合成的主要途径。 核酸合成旁路途径 当体内核酸合成主要途径发生意外情况时，还有一条补救的旁路途径来弥补，就是次黄嘌呤和5-磷酸核糖焦磷酸在磷酸核糖转移酶（HGPRT）的作用下可以直接合成次黄嘌呤核苷酸，然后再由次黄嘌呤核苷酸合成鸟嘌呤核苷酸和腺嘌呤核苷酸。 如何筛选那? 既然体内有两条核酸合成途径，那么就可以利用其中一条来进行筛选了，看图：  8-氮鸟嘌呤筛选原理 科学先驱们是这样解决的：首先用8-氮鸟嘌呤（一种嘌呤类似物）来对瘤细胞进行筛选，它可以参与核酸合成的旁路途径，但是由此合成出来的核酸不能具备正常核酸那样的功能，因此这种细胞就都会死去，能存活下来的细胞都是不能进行旁路合成核酸，该过程的本质就是为了筛选出HGPRT缺陷型细胞株。这种缺陷型的瘤细胞与B细胞进行融合，融合后的细胞则既能通过主要途径合成核酸，也能通过旁路合成，而未融合瘤细胞和瘤细胞自身融合细胞仍然只能通过主要途径合成核酸。 HAT选择培养基筛选原理 在选择培养基中添加某些物质来阻断核酸的主要途径，那么未融合的瘤细胞和瘤细胞自身融合的细胞在筛选过程中就会死去，能存活下来的就只有能进行旁路途径合成核酸的B细胞和瘤细胞的融合细胞了。A—氨基蝶呤为叶酸的结构类似物，正是它阻断了核酸合成的主要途径，阻碍了次黄嘌呤核苷酸和胸腺嘧啶核苷酸的合成。H—次黄嘌呤，可经核酸合成旁路途径合成次黄嘌呤核苷酸，从而完成嘌呤核苷酸的补救合成。T—胸腺嘧啶核苷酸，直接添加到培养基中来补足被阻断的嘧啶核苷酸的合成。  好了，杂交瘤细胞的筛选机制基本就是这样了 |
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