|
是不是做Western的时候，会遇到这样的情况呢？ 没错，就是背景很脏。造成背景脏的原因有很多，比如一抗没洗干净，或者二抗没洗干净，还有就是封闭的时候不完全。但其实，封闭液也是你们很容易忽略的一个环境哈。 封闭液有几种？是不是闭着眼睛都能回答我这个问题？不过你们稍微考虑一下，除了脱脂奶粉和BSA还有啥你们能想到的？ 第一种封闭液就是脱脂奶粉，这是异常便宜的封闭液品种，当然也应该是你们最常用的封闭液配方了。（甚至我们用过特仑苏） 但是，你们应该注意到的是，脱脂奶粉中有大量的生物素，也就是说你做的蛋白要是用生物素标记的，一抗也是抗生物素的。那用脱脂奶粉封闭，就会背景脏得不得了。还有一点就是脱脂奶粉的IgG能和抗山羊的二抗有交叉反应……所以…… 第二种封闭液就是BSA，这个相对来说贵一些，一般会用于一些磷酸化的WB里。但是，有些BSA偶联的多肽要做WB的话，就绝对不能用BSA作为封闭液。 第三种封闭液估计你们不会特别常用，其实就是吉利丁，做过布丁或者慕斯蛋糕的同学可能知道这是啥。其实就是Fish Gelatin，鱼明胶，但是这种封闭液成分价钱很傲娇，所以平时没什么人会使用这个。 还有一种比较常用的封闭液，就是0.25-2%的吐温20（Tween-20）。其实吐温是一种温和的蛋白变性剂，所以作为封闭液的话，有可能会导致一些蛋白的脱落，在结果中清除少量的蛋白质，有时候也会有一些残留的本底。当然，优点是由于吐温不是蛋白，所以可以在抗原检测后再进行染色。 李莫愁博士：其实选对了封闭液，在WB实验中也是非常关键的。这需要你在实验前先了解实验的目的以及实验所涉及的蛋白。当然，关键还要看老板的荷包。一般来说，5％脱脂奶粉溶于0.2％吐温20／PBS中（w／v）也是个不错的配方哦。好了，今天就先策到这里吧。 |
|
|
