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原文题目：The microbiome in early life: implications for health outcomes 期刊：Nature Medicine IF：29.886 发表时间：2016年 通讯作者：Jose C Clemente 摘 要 最近的研究已经表明了宿主遗传、产前环境和分娩方式如何塑造新生儿出生时的微生物菌群。在此之后，抗生素治疗、饮食或环境接触等产后因素将进一步影响婴幼儿微生物菌群的演变和免疫系统的发育，新生儿早期接触各种微生物有机体一直以来被猜测对其有保护作用。此外，流行病学研究表明，能够改变婴儿时期细菌群落的因素，将会增加婴儿在儿童时期患病的风险，强调了早期微生物组成的重要性。在这篇综述中，我们阐述了产前和产后因素如何影响微生物组成和免疫系统的构建，同时讨论了微生物介导疗法的前景和更为有效的方法去重新调整细菌群落，使其从致病性恢复到自我平衡状态。 综述结构 引言 在过去的几年里，我们对微生物组的了解大大增加了，越来越多的证据表明，早期的异常细菌群落可能通过改变免疫系统的构建而导致疾病。流行病学研究已经证实，破坏婴儿时期微生物群的因素、免疫和代谢条件之间有明确的相关性。然而，直到最近，我们才了解了婴儿时期微生物群落的组成，以及打乱群落分布可能如何导致疾病。最近的研究也描述了改变微生物组成的干预措施，开辟了克服婴儿时期微生物失衡作为一种预防性治疗方法的可能性。 我们将阐述新生儿多个身体部位的微生物群落，但是本文中的主要重点在肠道中发现的微生物群落。在整个论述过程中，使用“生命早期”来表示生命前2年的时期。年龄小于4周龄的孩子将称为“新生儿”，4周龄以上的孩子称为“婴儿”或“小孩”，一般来说，青春期年龄以下的称“儿童”。首先概述影响婴儿出生时及刚出生后微生物组成的主要因素，包括分娩方式，抗生素，饮食和周围环境，然后描述早期生命微生物的组成是如何在免疫系统的建立过程中起决定性作用的，以及如何失衡可能在生命后期诱发疾病。最后，总结目前早期生命微生物与疾病之间关系的论证，讨论干预改变微生物组成的治疗前景。 引言 在过去的几年里，我们对微生物组的了解大大增加了，越来越多的证据表明，早期的异常细菌群落可能通过改变免疫系统的构建而导致疾病。流行病学研究已经证实，破坏婴儿时期微生物群的因素、免疫和代谢条件之间有明确的相关性。然而，直到最近，我们才了解了婴儿时期微生物群落的组成，以及打乱群落分布可能如何导致疾病。最近的研究也描述了改变微生物组成的干预措施，开辟了克服婴儿时期微生物失衡作为一种预防性治疗方法的可能性。 我们将阐述新生儿多个身体部位的微生物群落，但是本文中的主要重点在肠道中发现的微生物群落。在整个论述过程中，使用“生命早期”来表示生命前2年的时期。年龄小于4周龄的孩子将称为“新生儿”，4周龄以上的孩子称为“婴儿”或“小孩”，一般来说，青春期年龄以下的称“儿童”。首先概述影响婴儿出生时及刚出生后微生物组成的主要因素，包括分娩方式，抗生素，饮食和周围环境，然后描述早期生命微生物的组成是如何在免疫系统的建立过程中起决定性作用的，以及如何失衡可能在生命后期诱发疾病。最后，总结目前早期生命微生物与疾病之间关系的论证，讨论干预改变微生物组成的治疗前景。 1 新生儿出生时的微生物 1.1 产前因素 基于培养法和不依赖于培养法的研究质疑子宫是否无菌，他们认为胎盘，羊水，胎膜，脐带血和胎粪中存在微生物。一些研究已经将可培养的肠球菌属，链球菌属，葡萄球菌和丙酸杆菌从脐带（1～2 log 10（（CFU/ 100µL样品）和胎粪样品（3-9log10（CFU / g组织））中分离出来了，同时从人体胎盘样品中获得了双歧杆菌和乳酸杆菌的DNA。研究表明宫内样品中含有细菌DNA，但不一定是可培养的细菌。 母亲的肠道微生物可以通过血液转移至胎儿，这一假说已经通过检测羊水和灌胃小鼠粪便中标记的屎肠球菌得到证实。最近的一项研究也报道了人胎盘中存在少量的细菌，且已经证明其为非致病菌，与口腔内的微生物群（主要包括厚壁菌门、柔膜菌门、变形菌门、拟杆菌和梭杆菌门）非常相似。研究者推测血液流动可能是将母体口腔内细菌传递给胎儿的途径。然而，细菌（特别是伯克霍尔德氏菌，放线菌和变形菌）的存在与怀孕风险相关，并且接近25％的早产儿是由于母亲宫内感染和隐匿性微生物侵入羊膜腔而造成的。在子宫内检测到的细菌是常见的阴道寄生菌，这表明至少在早产时，子宫微生物群来自阴道感染。 许多研究通过定量PCR和16S rRNA测序来鉴定不可培养的细菌。然而，这些方法不能准确量化细菌细胞的数量，尤其是不能区分游离DNA，死细胞，活细胞和代谢活跃的细胞。这使得明确胎盘中微生物的存在和评估宫内环境中的细菌数量是否是怀孕期间的风险因素较为困难。此外，这些研究中缺少真正的对照（如孕妇外周血）和绝对的细菌定量，这是一个严重的限制，因为顺产和剖腹产与轻度败血症相关。所用试剂和提取试剂盒也可能含有污染性DNA，在细菌量较低的样品中，这是一个特别严重的问题。需要进一步的研究来确认宫内存在的微生物并定量分析，确定其可能如何影响新生儿的发育。 1.2 分娩 新生儿第一次接触微生物环境主要发生在分娩过程，并且高度依赖于分娩方式。顺产婴儿的皮肤，肠道和口腔及鼻咽腔最初含有乳杆菌属，类似于母亲阴道微生物群。相反，剖腹产婴儿的皮肤，口腔和肠道缺乏这种物种，而是常见的皮肤和环境微生物，如葡萄球菌，链球菌或丙酸杆菌。这种初始微生物随时间的推移，适应每个身体部位的理化和生物学特性，并且根据不同可用的营养物质发生改变。尽管顺产婴儿和剖腹产婴儿之间的这些差异逐渐缩小，但是细菌信号仍然与剖腹产婴儿相关，直到12～24个月龄。这表明早期的定植为与每种分娩方式相关的细菌群落提供了竞争优势。此外，剖宫产婴儿已经显示特定的细菌类群延缓菌群在肠道的定植。尽管流行病学研究显示剖宫产分娩与各种疾病之间存在关系，但这种关系仍有待证明。 明确顺产新生儿出生时获得的第一种细菌，最重要的是鉴定母亲阴道微生物群落。在非妊娠妇女中，至少已经确定了六种类型的阴道微生物群，并且其中五种细菌群落类型（CST）是已知的。这些类型中有四种在亚洲和白人女性中发现，被认为是乳酸杆菌菌种（卷曲乳杆菌（CST I），加氏乳杆菌（CST II）， 惰性乳杆菌 （CST III）和 詹氏乳杆菌（CST V））。CST IV常见于黑人和西班牙裔妇女中，其特征为低水平的乳酸杆菌属，增加了各种厌氧菌的多样性。 怀孕导致阴道微生物组成发生许多变化，这在孕妇和非孕妇之间有着显著性差异。在怀孕期间，微生物群的多样性较低，菌群组成类别的稳定性较高，并且一般乳杆菌菌种占优势，例如卷曲乳杆菌或惰性乳杆菌，乳酸杆菌属的优势和其稳定性突出了这些细菌物种维持阴道生态系统健康的重要性。在怀孕的美国妇女中，阴道微生物群在乳杆菌属主导的种群之间转变，尽管很少转变为CST IV。已经证实欧洲妇女怀孕期间阴道富含乳杆菌属，厌氧菌富集的乳杆菌阴性菌群也有报道。如上所述，阴道微生物群落的结构和组成与种族相关，表明宿主遗传或环境因素在塑造阴道微生物群中发挥作用。因此，新生儿可能会在不同的微生物环境中开始他们的生活，从而强调了研究不同人群微生物群落特点的重要性。 2 影响生命早期微生物的因素 2.1 抗生素 抗生素已经广泛应用，并且是婴儿最常用的药物之一。然而，使用产后抗生素会破坏新生儿肠道微生物群的微妙生态系统。在生命早期持续使用抗生素也与增加患有各种疾病的风险有关，强调了了解新生儿微生物群与哮喘，2型糖尿病，炎性肠病（IBD）或乳过敏症之间关系的重要性。早期使用抗生素与哮喘病发展之间的关系，在瑞典研究团队最近的研究中被质疑，该研究表明，共同的家族因素和呼吸道感染是替代风险因素。 这些相关性不一定是因果关系，据报道，早期接触过抗生素的婴儿可能会比不服用抗生素的婴儿更容易受到病毒感染，这表明，病毒免疫力受损会增加抗生素时效和患哮喘病的风险。抗生素导致微生物的变化，无论是在组成还是回到基线的时间上，都取决于身体部位，或者是使用抗生素的类型和剂量。这些变化对于婴儿的影响还不是特别清楚，让我们对抗生素如何在这个重要的发育时期影响肠道微生物的认识上，留下了空缺。 在生命早期如何通过抗生素破坏微生态系统导致疾病的研究中，小鼠模型有助于人体研究并提供进一步的见解。研究表明，模拟试验中，在老鼠幼龄时期使用低剂量抗生素或脉冲抗生素治疗的结果均显示肠道微生态被显著破坏了，随后老鼠体内的总脂肪量增加。抗生素介导的治疗，使乳杆菌，肠杆菌和酵母菌的丰度降低，并且节丝状菌会导致辅助细胞T17（TH 17）在结肠中反应钝化。使用抗生素治疗的新生小鼠对食物过敏原致敏性增强。出现这种现象的原因部分归于梭菌属，其能够诱导产生白细胞介素（IL）-22，这种物质能够防止食物过敏原穿过肠上皮细胞层。 抗生素治疗也可以改变细菌、病毒和真菌之间的微生物平衡。例如，抗生素的出现使胃肠道真菌（白色念珠菌）的丰度增加，从而使由过敏反应引起的气道疾病发展，这是由于小鼠体内肥大细胞、IL-5，IL-13和其他炎症介质被诱导，以及人类抗病毒免疫应答的损害而造成的。 尽管小鼠模型大大促进了我们对抗生素如何改变宿主微生物组成和健康状况的认识，但是实验小鼠与人类的免疫学特征明显不同，从而限制了我们从小鼠研究得出的结论推断到人类疾病。然而，长期使用抗生素治疗是不常见的，因此，发展反映人类生理反应的人源化小鼠，从而更好地表征抗生素对人类健康的影响至关重要。 2.2 饮食 在生命的最初几个月里，婴儿主要从母乳或配方乳中获得营养。尤其母乳喂养与婴儿有许多益处相关（如增加抗感染，降低肥胖风险或降低过敏风险），对于母亲而言，哺乳期间与患有高血压、高血脂、心血管疾病和2型糖尿病的风险降低相关。尽管母乳喂养对哮喘的积极影响仍存在争议，但最近的研究表明，当调整干扰因素时，无论母亲哮喘状况如何，长时间的母乳喂养可以改善肺功能。母乳喂养产生的益处部分被认为是通过母乳中分泌的因子介导的，包括免疫球蛋白（IgA），乳铁蛋白和防御素。双歧杆菌和乳杆菌在母乳喂养的婴儿中比纯配方粉喂养的婴儿含量更丰富，这导致肠道内含有较多的短链脂肪酸(SCFAs)，酸性更强。肠道pH值降低可作为防治常见病原微生物的防御机制。在新生儿中，短链脂肪酸通过细菌发酵母乳中的低聚糖产生。人乳寡糖（HMOs）不直接被宿主消化，而是作为结肠细菌的能源。 值得注意的是，仅在婴儿中发现的双歧杆菌菌株（例如，长双歧杆菌婴儿亚种）可以代谢乳低聚糖，而成年人肠道中的物种（长双歧杆菌长亚种）具有维持发酵复合碳水化合物的能力，但不能发酵人乳寡糖。母乳中含有多达 10 7个细菌细胞/ 800mL，包括葡萄球菌、链球菌、乳杆菌、双歧杆菌等细菌，作为新生儿的播种物，尽管这些母系细菌的确切起源还有待阐明。细菌多样性初始缩减之后，随着饮食多样性的不断增加，婴儿能够消化的物质逐渐增多，导致微生物的组成改变，细菌利用碳水化合物、合成氨基酸和维生素的相关功能改善。到3岁时，婴儿的微生物基本上趋于类似于其成年时的状态。 2.3 益生菌和膳食补充剂 益生菌是为宿主提供健康益处的活性微生物，而益生元是有利于有益微生物生长的物质。补充添加了益生菌或益生元的婴幼儿配方粉越来越普遍，尽管缺乏支持其功效的数据。益生菌对儿科疾病（包括过敏，肥胖，胃肠道感染或结肠）的作用已经被广泛研究，但是它们的益处仍然存在争议。一些元分析发现，益生菌在治疗特应性皮炎方面有积极的作用，而对于小于12月龄的婴儿并没有发现其他方面的重大影响。在一项元分析中发现单独使用乳杆菌或与其他细菌联合使用降低了患特应性湿疹的风险，但是这种组合在另一项元分析中没有效果。在益生菌对致敏和哮喘作用的元分析研究中，发现IgE和特应性致敏总体降低，但不能直接减弱哮喘。 配方中最受欢迎的益生菌补充剂是乳酸杆菌和双歧杆菌属。有研究已经探究了罗伊氏乳杆菌DSM 17938对婴儿绞痛的影响。给予16周龄新生儿药物21天后，与对照组相比，肠道乳杆菌显着增加，大肠杆菌和氨降低。与给予安慰剂的对照组相比，约氏乳杆菌La1在给药后增加了总乳酸杆菌的数量，并且在给药停止至少2周时，新生儿体内17％的活菌被排泄。在生命最初的六个月期间给患有过敏性疾病风险的婴儿补充长双歧杆菌BB 536和鼠李糖乳杆菌GG，发现其并未影响婴儿肠道微生物的总体组成，停止补给，益生菌在肠道中并没有长期存在。给6月龄婴儿补充加有低聚半乳糖的发酵乳杆菌CECT5716配方食品，得到类似的结果。不考虑胃肠道和上呼吸道的感染降低，给婴儿补充6个月益生菌后，仅导致双歧杆菌和乳杆菌的数量增加，而短链脂肪酸并没有明显的变化。人乳寡糖虽然不存在于牛乳中，但也经常作为益生元添加在婴幼儿配方食品中。添加到配方食品中不易被消化的低聚糖导致结肠pH降低，短链脂肪酸增加，这与母乳喂养产生的结果类似，这可能与选择性刺激双歧杆菌和乳杆菌属相关。然而，迄今为止的大多数研究表明，益生菌或益生元带来的益处，既不是肠道菌群的改变，也不是益生菌在肠道长期定植模式的建立。 营养补充剂的特征是其对微生物的组成和宿主健康的影响。一项对12个月龄美国婴儿肠道微生物组成的研究中，给予婴儿不同的饮食（纯肉作为主补充食物，铁强化谷类食品，或铁和锌强化谷类食品），研究发现，铁强化谷类食品组婴儿与其他两组相比，肠道菌群在门的水平上存在显著性差异，并且乳杆菌种群数量显著减少。鱼油是另一种常见的膳食补充剂，其对婴儿肠道微生物的影响比向日葵油更显著，但这种影响仅对于9个月前断奶的婴儿。这表明大量存在于鱼油中且被推测对婴儿发育有益的长链多不饱和脂肪酸（LCPUFA）可能仅在没有母乳的条件下才能发挥它的益处。值得注意的是，在一项对6～14岁非洲儿童的研究中，发现与对照组相比，儿童饮食中添加铁导致了肠道菌群组成发生显著变化，肠杆菌数量增加，乳酸杆菌的数量减少，粪便钙卫蛋白增加，这些变化都是判定肠道炎症发生的替代指标。这个结果强调，在确定膳食补充和饮食建议对人体的影响之前，需要考虑不同人群肠道微生物组成的差异。 2.4 环境接触 新生儿周围的环境也是微生物的自然来源，可以在不同的身体部位定植。例如，同居可以通过共用物体、接触物质表面和室内空气增加细菌交换的可能性。通过吸吮清洁婴儿奶嘴的做法也与婴儿独特的口腔微生物群及发生过敏风险较低相关。在对60个美国家庭的研究中，发现家庭成员之间比不相关人之间的口腔、肠道、特别是皮肤微生物群更相似。此外，同居但基因不相关的父母与其子女的微生物菌群相似度高于不相关孩子。家族成员的细菌基因组测序结果进一步证实了这些发现，且家庭成员中共有的菌株在不相关人中并未发现。值得注意的是，这些共有菌株中的一部分存在于母亲及其成年女儿的身体中，表明早期接触特定菌株可导致其终身定植。 猜测生命早期经常接触宠物和动物对婴儿有保护作用，这是通过增加接触有助于增强免疫耐受性的微生物而实现的。在一项针对3143名婴儿的研究中，让婴儿在生命的第一年接触室内狗（但不包括室外狗，猫或农场动物），据报道其与临床I型糖尿病呈负相关性。研究已经表明早期接触宠物会降低过敏和哮喘的频率，尽管这种诊断机制尚不清楚。为了探究这种关联，一项研究用养狗人家房子中的灰尘进行了小鼠试验，发现这些小鼠肠道微生物群中的约氏乳杆菌增加了，肠道微生物群的变化可能部分解释了接触动物带来保护作用的原因。在生命的最初两个月接触家庭尘埃中的内毒素及在较大的家庭空间中生活使双歧杆菌的数量达到高峰，乳杆菌、青春双歧杆菌和艰难梭菌的丰度降低，这种变化与过敏症相关。在对芬兰和俄罗斯卡累利阿婴儿的研究中，也表明了生命早期接触环境的重要性。这些地区地理位置接近，但社会经济地位差异显著。虽然在20世纪40年代对花粉和宠物的敏感程度相似，但是30年后的芬兰儿童过敏更常见。这些差异中的一部分归因于环境尘埃与饮用水中的细菌，需要进一步的研究对这些微生物进行全面地评估。一项关于婴儿卧室灰尘的研究显示，生活在农场的婴儿肠道细菌和真菌的多样性高于那些只参观农场但没有住在那里或从未去过农场的婴儿。农场住宅中的微生物通常与动物棚舍中的微生物相关，进一步表明接触环境是幼年时期细菌定植的潜在途径。 2.5 宿主遗传 宿主遗传对人类疾病非常重要，但是直到最近我们才开始了解微生物如何与宿主基因相互作用。例如，已知具有遗传因素的代谢紊乱与不同的肠道微生物群组成有关，表明宿主的细菌调节受损是发病的潜在机制。确定宿主遗传与微生物群之间如何相互作用相当复杂，其归因于数以千计的细菌群与数以百万计的遗传多态性之间的指数数量的相互作用。Goodrich及其同事已经证明，遗传可以部分改变细菌组成，Chrisrysnellaceae 家族成员是可遗传的，而瘤胃菌科，毛螺菌科和拟杆菌门成员的定植主要是环境决定的。需要进一步的研究来确定这些可遗传的菌群在生活中是什么时候被获得的，以及与其他因素相比，在形成早期微生物组成时与宿主遗传之间的相关影响是什么。 图1 塑造新生儿微生物群的因素。 母亲阴道感染或牙周炎可导致细菌侵入子宫环境。肠道和口腔微生物可以通过血液从母体输送到胎儿。分娩模式塑造新生儿的初始细菌接种。出生后的因素如抗生素的使用、饮食(如母乳喂养与配方、固体食物的摄入)、婴儿的遗传和环境暴露在早期生活中进一步影响了微生物群。随着饮食与年龄的变化，微生物群落逐渐向类似成人的形态转变，通常在3岁时达到成人水平。 3 新生儿微生物群在免疫系统构建中的作用 宿主微生物群与免疫系统之间的平衡对致病后的自我恢复和防止异常炎症至关重要（图2)。多项研究报道，婴幼儿的肠道微生态失调与慢性炎症相关，如肥胖，IBD或成人期的牛皮癣。 在顺产过程中，婴儿从母亲的阴道、皮肤组织、粪便中获得到他们最初的细菌接种物，使新生儿未成熟的免疫系统暴露于过量的细菌环境中。新生儿先天性免疫系统偏向于TH2表型，其与检测到的蠕虫和寄生虫相关，但也与过敏反应的诱导有关，并且偏向于TH1细胞极化细胞因子以避免潜在的不良促炎症反应，从而使微生物存在于原来的位置并定植。这种免疫反应受损使免疫抑制，从而使新生儿更容易致病。因此，经常在不同时间和年龄段多次经历致病性遭遇，会使免疫系统从TH2向TH1过渡（图2），减少新生儿患过敏性疾病及成年时患过敏性疾病的机会。相反，婴儿肠道处于微生态失调的状态，会强烈地促进免疫系统向TH1偏倚，推动免疫系统促炎症反应，分泌细胞因子IL-12和干扰素（IFN）-g。处于这种炎症状态会促进组织损伤、增加感染率、降低组织修复能力，干扰正常的免疫调节系统，从而可能导致长期的不良后果，如患IBD，过敏和自身免疫性疾病。 图2 微生物和肠道免疫系统在早期生命中相互作用的长期影响 包括派伊尔氏淋巴集结和肠系膜淋巴结在内的二级淋巴结构在细菌定植之前在产前发育。肠道微生物定植后共生细菌和宿主免疫系统之间发生相互作用。派伊尔氏淋巴集结顶端表面的微皱褶细胞（M）通过胞吞作用对腔内抗原和细菌发挥免疫作用，之后树突状细胞（DCs）呈递这些抗原以诱导T细胞依赖的B细胞成熟，促进分泌二聚体IgA，其在固有层的浆细胞中起着防御病原体的关键作用。细菌也可以通过固有层中的DCs进行胞质转运，并在排出的肠系膜淋巴结中呈递给T细胞以诱导T细胞分化。在稳态环境中（左下），与共生细菌有关的MAMP通过刺激肠上皮调节性细胞因子产生（IL-25，IL-33，胸腺基质淋巴细胞生成素（TSLP）和转化生长因子（TGF）-b）细胞，将信号转导至DCs，诱导Treg细胞的发育并促进IL-10分泌，在营养不良状态（右下），共生细菌的减少导致病原体和病原体富集。由肠上皮细胞感知的致病MAMP诱导促炎症细胞因子（IL-1，IL-6和IL-18）的分泌，促进效应T细胞的发育,这些效应T细胞分化成CD4 + TH1和TH17细胞，其分泌促炎性细胞因子如IL-17，肿瘤坏死因子（TNF）-α和IFN-g，这些细胞因子诱导嗜中性粒细胞富集使宿主抵抗致病性感染。派尔氏斑块中的B细胞成熟导致产生IgG，其通常与宿主自身免疫和变态反应相关。 最近在新生小鼠中进行的一项研究表明，小鼠免疫耐受性（缺乏对特定抗原反应的能力，这些抗原能够使免疫系统区分“自我”与“非自我”组织）是在顺产过程中获得的，而不是通过剖宫产获得的。顺产小鼠能够自发激活肠上皮细胞，并且对脂多糖（LPS)具有抗性，这种脂多糖是在婴儿出生后不久，引起宿主免疫应答的革兰氏阴性细菌膜中发现的分子。从而通过对感染免疫应答基因的下调产生耐受性。有研究在对芬兰、俄罗斯卡累利阿和爱沙尼亚的222名婴儿研究中，进一步探究了脂多糖和肠道微生物的组成对早期生命的作用。芬兰和爱沙尼亚婴儿肠道微生物组成以拟杆菌为主，因此这些婴儿接触到的脂多糖主要来源可能是这种细菌属，然而，俄罗斯婴儿肠道中拟杆菌的丰度明显较低。研究发现来自拟杆菌的脂多糖在结构上，与来自其他细菌的不同，更特别的是，它还在体外和非肥胖糖尿病（NOD）小鼠中能够抑制其耐受性。这些发现表明芬兰和爱沙尼亚婴儿患自身免疫性疾病概率较俄罗斯卡累利阿婴儿高。 然而，不同种类的拟杆菌可以引起不同的免疫反应。例如，脆弱拟杆菌通过作用于调节性T（Treg）细胞已被证明具有抗炎作用。脆弱拟杆菌产生表面多糖A（PSA），这种多糖是在Treg细胞上被Toll样受体2（TLR2）识别的一种微生物相关的分子模型（MAMP）。TLR2和PSA诱导Treg细胞并限制TH17反应，由此促进肠道和免疫的耐受性。然而这种保护作用仅见于新生儿肠道免疫的发育中，在成年小鼠中并未发现。 4 新生儿微生物与疾病 4.1 早期生命微生物与疾病之间的关系 如上所述，新生儿的异常微生物群与儿童时期及以后患病相关。例如，在初始治疗患有克罗恩病（CD）的儿童中，发现与健康儿童（肠道中的拟杆菌属，铁杆菌属或瘤胃球菌属的丰度较高）相比，患有CD的儿童肠道中富集韦荣球菌科、奈瑟氏球菌科及梭杆菌科。 哮喘的发病率也与婴儿的肠道异常微生物相关。在对319名婴儿肠道微生物的纵向分析中，发现尽管各组间儿童肠道中细菌多样性和组成差异不明显，但在1岁时，同时患有特应性过敏性疾病与哮喘的婴儿肠道中Fecalibacterium、毛螺菌属、罗思氏菌属和韦荣球菌属的含量与3月龄相比较，明显降低了。根据计算预测，研究证实，在3个月龄时，LPS生物合成减少，短链脂肪酸乙酯的生成也减少。 最近针对对牛奶过敏的226名婴幼儿研究中发现，3至6月龄的婴儿肠道微生物组成与牛奶过敏相关，且一直持续到8岁，而不是7至12月龄或13至16月龄大幼儿。当小于6月龄婴儿不再对牛奶过敏的时候，其肠道中梭状芽胞杆菌和厚壁肠壁菌较丰，然而其能够长时间在肠道中定植与高丰度的肠杆菌、沙门氏菌及Trabulsiella相关。较小年龄的婴儿肠道中微生物组成发生这样的变化，通常伴随着细菌代谢脂肪酸的降低，这与观察到的健康婴儿肠道中链短脂肪酸水平低于牛奶过敏婴儿的结果一致。这项研究和其他研究表明，生命早期肠道微生物群即使被短时间的破坏，在婴儿以后的生活中也会引起不同的变化。 用无菌小鼠进行研究，可以更精确地确定微生物如何失衡导致疾病。例如，Fecalibacteriumsp、毛螺菌属、罗思氏菌属和韦荣球菌属 （FLVR）在患有特应性过敏性疾病和哮喘的婴儿肠道中显著减少。将这些细菌接种于患有气道炎症模型的无菌小鼠中，发现炎症有所改善，类似地，将马拉维双胞胎中，与营养不良相关的微生物移植到无菌小鼠体内后，小鼠的体重下降了。Noval-Rivas及其同事还发现食物过敏模型小鼠的肠道微生物组成不仅与野生型（WT）小鼠不同，而且将食物过敏模型小鼠肠道微生物接种到野生型无菌小鼠时甚至可以促进小鼠对食物的过敏反应。总之，至少在动物模型中，这些研究结果清楚地表明了早期生命中的异常微生物和疾病之间的因果关系。 4.2 微生物介导的疗法 改变微生物组成的方法通常可以分为三大类：减少、调节、置换或修复。 例如，抗生素通常用于治疗不一定由特定病原体引起的病症，原因是其具有有效减少肠道微生物的能力（图3）。在治疗婴幼儿IBD中，有时通过单独或联合使用抗生素来治疗疾病，然而，婴幼儿时期长期使用抗生素会带来很大的风险。 细菌含量也可以通过饮食干预来调节，从而阻止有害细菌的繁殖或促进有益细菌的生长（图3）。肠内专用营养（EEN）是一个臭名昭著的例子， EEN由液体营养素组成的配方替代普通膳食成分，通过口服或喂食管喂养婴幼儿。EEN被用作小儿克罗恩病的一线疗法，能够诱导临床症状缓减并使炎症标记正常化。在最近一项对23名16岁以下CD患者的的研究中，15名患者接受EEN治疗8周后，在改善了疾病状况的同时反常地增加了与健康对照者之间的肠道微生物组成差异。这个意外的结果表明，此治疗机制可能使结肠细菌含量水平降低和潜在有害细菌代谢物浓度较低。尽管EEN在治疗儿科克罗恩氏病中取得了的成功，但是低适用性和低效的喂养方式（喂食管）使得长期使用EEN 非常困难。 图3 微生物治疗疾病的整个过程 在临床前阶段，该疾病尚未显现，症状不明显，但微妙的生物学变化可能已经发生。诸如使用特定的细菌作为接种物防止早期肠道微生物失调导致疾病发展的方法，在疾病的早期阶段可能是最有效的。随着疾病的发展，体内微生物群的破坏导致病原生物富集（如红色所示），产生促炎症代谢物和炎症通路激活（图2）。保护上皮的粘液层由于疾病严重程度的增加而累积损伤变得更薄。在这个阶段，饮食干预和抗生素可能被用来极大程度地控制细菌的含量。在晚期阶段，持续的损伤导致粘液层进一步变薄，从而使细菌穿透上皮屏障。积极的抗生素治疗结合粪便微生物移植可以使微生物平衡恢复在这一点上。 营养不良的研究提供了婴儿时期饮食缺陷如何塑造肠道微生物群的极端例子。史密斯和他的同事研究了317名马拉维双胞胎生命前三年的肠道微生物组成。在研究过程中，发现43％的双胞胎因营养不良，其肠道菌群不平衡。虽然健康双胞胎的肠道微生物群逐渐呈现出成熟的趋势，但是给予营养不良的双胞胎专门治疗营养不良的药物后，其肠道微生物的组成也未能向健康双胞胎婴儿肠道微生物组成的状态发展。这些结果表明，目前的饮食干预措施可能无法有效地将微生物转化为非致病性状态，因此迫切地需要进一步的研究以揭示不同饮食如何改变肠道微生物含量和健康状况。 高度营养不良的环境可能需要更激烈的方法来改变肠道微生物的含量。粪便微生物群移植（FMT）旨在用外源性微生物替换本来存在肠道中的微生物（图3）。FMT在难治性艰难梭菌感染的治疗中非常有效（CDI），并且在治疗儿童和青年人（7至21岁）溃疡性结肠炎方面有所探究。然而，该疗法在其他情况下的疗效低于在治疗CDI中的疗效，需要进一步的研究优化提高FMT治疗的因素（如剂量，给药途径和剂型）。此外，FMT的使用仍处于监管调整过程中，整个肠道菌群最终将被设计好的细菌群落所取代的前提是设计的微生物群落具有相当好的功效。在婴幼儿肠道微生物移植的研究中，设计和实施都十分具有挑战性，但是考虑到儿科IBD等疾病的治疗选择有限，预测这将是一个非常有趣的应用。鉴于早期微生物群对健康的影响，旨在恢复肠道微生物平衡的预防性治疗是非常理想的（图3）。最近的研究证明了，剖宫产婴儿肠道中异常的微生物可以部分恢复至类似于顺产婴儿肠道微生物的状态。用分娩前一小时引入产妇阴道内的纱布擦拭剖宫产婴儿，其皮肤、口腔和肛门富集乳杆菌属或拟杆菌属，且这些剖宫产婴儿肠道中的微生物群与顺产婴儿微生物群非常相似。这表明将阴道细菌转移到缺乏这些菌的新生儿肠道中是可行的，尽管此过程对健康的影响尚未确定。 5 结论与展望 生命早期中的异常肠道微生物群与患疾病风险增加相关，但是我们仍然缺乏确凿的证据证明这些异常的细菌群落实际是病原体。超越单纯与特定细菌联系的机械学研究将提供更多有价值的信息而被人类所获悉。然而，肠道菌群早期定植对晚期定植的影响只能了解部分。成年动物研究已经显示了如何通过将膳食纤维发酵成可以诱导结肠中Treg细胞的短链脂肪酸来调节免疫反应。因此需要类似的研究深入了解不同微生物群落在早期生命中如何影响免疫系统的构建。 值得注意的是，在研究设计和分析过程中，微生物组的个体差异往往被忽视。纵向研究中，每个研究对象作为自身对照可以改善这个问题，需要寻找更有效的方法分析已有的微生物数据。此外，关键的是鉴定新生儿微生物群在肠道以外器官中的变化，从而更好地认识影响这些身体部位病症的发病机理。 我们认为，目前仅通过测序来估计微生物组成的方法需要结合其他技术来量化细菌，并区分活细菌和死细菌。细菌免疫反应的强度取决于细胞活力，获取细胞活力的方法将提供微生物如何塑造免疫和影响健康的更加丰富的见解。研究不仅仅局限于细菌类别，还涉及功能特性和机制。转录组学不仅可以提供样本中的细菌和细菌基因的信息，而且还可以为宿主的转录活动提供信息。代谢组学也可以帮助确定细菌代谢物如何促进与宿主的相互作用以及它们如何影响宿主的健康状况。 不同人群肠道中微生物的群落结构和多样性也有很大差异。事实上，大肠杆菌或幽门螺杆菌菌株在不同人群中显著不同。另外非致病细菌菌株之间的基因组差异也与其导致的疾病差异相关联。明确来自不同人群的新生儿接触到的不同的细菌对进一步阐明破坏微生物相关的条件至关重要。预计微生物干预可能预防或改善与早期生命中异常微生物相关的疾病。为实现这一愿景，改变细菌群落的方法将不得不完善。调节人类微生物的研究只能在有限的时间内完成，因为细菌群落在干预停止后通常会迅速返回基线。此外，饮食干预可以快速改变微生物含量但对健康没有意义。因此，不清楚这些改变需要多长时间才能永久改变微生物组成并改变病程。最近，粪便菌群移植治疗溃疡性结肠炎的研究结果似乎表明在成人治疗中，短期的干预措施可能没有价值。因此，测试微生物干预不同时间，不同剂量或不同输送途径的研究，将是决定生命早期可塑性细菌群落如何变化，以及为了治疗目的如何对其进行修饰的基础。虽然这些问题都是需要大量的努力才能得到回答的复杂问题，但是目前对婴儿时期微生物群特征化，取得了迅速的进展，这将有助于治疗生命早期异常微生物导致的疾病。 本文由王瑞编译，江舜尧编辑。 |
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