|
泛素连接酶Cbl-b在肿瘤浸润淋巴细胞和自然杀伤细胞中高表达可诱导免疫细胞无能，如同另一免疫靶点PD-1一样，而干扰Cbl-b可增强抗肿瘤免疫效应。研究发现，Cbl-b在胃癌组织中高表达，且与胃癌侵袭及淋巴结转移相关。而在乳腺癌细胞系MDA-MB-231中应用siRNA抑制Cbl-b表达或敲除Cbl-b基因后，MDA-MB-231细胞丧失降解基质的活性，其浸润活性受到显著抑制。 前期研究中发现，黑素瘤组织及细胞株均高表达Cbl-b蛋白，并且Cbl-b表达水平与黑素瘤进展、Clark分级和Breslow厚度均呈正相关，推测Cbl-b可能作为癌基因参与黑素瘤发病过程。为进一步验证该设想，王小坡等构建Cbl-b shRNA慢病毒载体，探讨其对黑素瘤A375细胞增殖、凋亡、细胞周期及侵袭等生物学行为的影响。 泛素连接酶Cbl-b基因短发卡RNA慢病毒载体构建及其对A375细胞生物学行为的影响 王小坡 倪娜娜 熊竞舒 宋昊 姜祎群 陈浩 曾学思 孙建方 作者单位：中国医学科学院 北京协和医学院 皮肤病研究所病理科 DOI：10.3760/cma.j.issn.0412-4030.2018.03.003 《中华皮肤科杂志》，2018，51（3）：177-181 【关键词】 黑素瘤； 原癌基因蛋白质c⁃cbl； RNA，小分子干扰； 细胞增殖； 细胞凋亡； 细胞周期； 基因，Cbl⁃b； A375细胞； 短发卡RNA 设计并合成3条沉默Cbl-b基因的特异性shRNA及1条阴性对照shRNA，构建慢病毒载体。将A375细胞分成5组，即分别用3条特异性shRNA转染的CBLB-shRNA-1组、CBLB-shRNA-2组、CBLB-shRNA-3组，阴性对照组（阴性对照shRNA转染），空白对照组（转染空载体）。 慢病毒转染A375细胞72 h后Cbl-b蛋白表达 1：CBLB-shRNA-1组； 2：CBLB-shRNA-2组； 3：CBLB-shRNA-3组； 4：阴性对照组； 5：空白对照组 结果显示，成功构建3条Cbl-b shRNA慢病毒载体，Western印迹法显示CBLB-shRNA-3蛋白沉默效率最高。与阴性对照组、空白对照组相比，CBLB-shRNA-3组转染后72 h和96 h细胞增殖能力显著降低，转染后72 h细胞凋亡率显著增高，G1期细胞比例明显增高，细胞穿膜数明显降低（均P <> 以上结果说明，CBLB-shRNA-3重组shRNA慢病毒载体能高效沉默Cbl-b蛋白，并可促进A375细胞凋亡，抑制A375细胞增殖、细胞周期进程和侵袭能力。针对Cbl-b靶向治疗有可能成为黑素瘤治疗新靶点。 |
|
|
