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医学基因工程知识点笔记 原作：龚蕾
学习方式，视频、有声书，笔记。 主要内容，基因与基因组、基因的概念与特性、DNA的结构与性能、DNA的复制与表达，基因组，基因工程的基本概念，基因工程发展历史背景，基因组计划于后基因组时代，基因工程学的基本理论与技术，基因工程工具酶及应用。限制性核酸内切酶，DNA连接酶，反转录酶，DNA聚合酶，碱性磷酸酶，基因工程的克隆载体，细菌质粒的生物学特性，基因克隆，目的基因的获得，基因重组，原核细胞表达系统，真核生物表达系统，酵母表达系统，哺乳动物细胞表达系统，聚合酶链反映，核酸杂交，常用的DNA测序方法，测序的意义，生物芯片技术，基因工程学的应用，基因工程抗体，真核生物基因表达调控，人类基因诊断与治疗，基因诊断，基因治疗，单核苷酸多态性，转基因技术，聚合酶链反应，重组子的筛选与鉴定等。 知识点：基因工程原称为遗传工程，从狭义上讲，基因工程是指一种或多种生物体的基因与载体在体外进行拼接重组，然后转入另一种生物体受体内，使之按照人们的意愿遗传并表达出新的性状。因此，供体、受体，载体称为基因工程的三大要素。 分离目的的基因，限制酶切目的基因与载体，目的基因和载体DNA在体外连接，将重组DNA分子转入合适的宿主细胞，进行扩增培养，选择，筛选含目的基因的克隆，培养，观察目的基因的表达。 基因工程载体必须满足哪些基本条件，具有对受体细胞的可转移性或亲和性，具有与特定受体细胞相连适应的复制位点或整合位点，具有合适的筛选标记，分子量小，拷贝数多，具有安全性。 质粒载体有什么特征，有哪些主要类型。自主复制性，可扩增性，可转移性，不相容性。 质粒的构建，删除不必要的DNA区域，尽量缩小质粒的分子量，以提高外源DNA片段的装载量，一般来说，大于20KB的质粒很难导入受体细胞，而且极不稳定。灭活某些质粒的编码基因，如促进质粒在细菌间转移的MOB基因，杜绝重组质粒扩散污染环境，保证DNA重组实验的安全，同时灭活那些对质粒复制产生负调控效应的基因，提高质粒的拷贝数。加入易于识别的选择标记基因，最好是双重或多重标记，便于检测含有重组质粒的受体细胞。在选择性标记基因内引入具有多种限制性内切酶识别及切割点的DNA序列，即多克隆接头，便于多种外源基因的重组，同时删除重复的酶切位点，使其单一化，以便环状质粒分子经酶处理后，只在一处断裂，保证外源基因的准确插入。 人工人色载体，将细菌结合因子，酵母或人类染色体上的复制区，分配区，稳定区与质粒组装在一起，即可构成染色体载体。 人工构建的，具有两种不同复制起点和选择标记，可以在两种不同的寄主细胞中存活或复制的载体。 基因工程可应用于：1、植物。抗虫、抗病、抗逆转基因植物，利用转基因改良植物的品质。2、动物，提高动物生长速度，改善畜产品品质，用转基因动物生产药物。3、基因治疗，把正常的外源基因导入病人体内，使该基因表达产物发挥作用。 蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需求。 基因是遗传信息的基本单位，携带着某种蛋白质或DNA的遗传信息，从化学本质上，基因是一段携带特定遗传信息的脱氧核糖核苷酸序列，是构成巨大遗传单位染色体的组成部分。 基因工程，按照人们的愿望，进行严密的设计，利用体外DNA重组和转基因等生物技术，有目的地改造生物性状使之具有满足人们特定需求的能力，最突出的优点，打破了常规育种难以突破的物种之间的界限，使不同的物种之间可以进行遗传信息的重组和转移。 同裂酶，有时，一些限制性内切酶虽然来源不同，但是识别序列相同，这样的酶称为同裂酶，此种酶切割位点可同可不同。 杂种位点，由一对同尾酶分别产生的粘性末端共价结合形成的位点，一般不能被原来的任何一种同尾酶识别。 基因表达，基因通过DNA的转录和RNA的转译等过程，将其所携带的遗传信息转变成蛋白质的过程。 克隆，是指从一个共同祖先经无性繁殖得到的一群遗传上同一的DNA分子，细胞或个体所组成的特殊生命群体。名词，指从同一个祖先产生这类词的DNA分子群体，细胞群体或个体群体的过程。
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