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技术领域 本发明涉及中药制剂及制备方法，具体涉及一种抗菌抗病毒的中药复方制剂及制备方法。 背景技术 流感是流感病毒引起的急性呼吸道传染病。在历史上，曾发生过多次世界范围的流感大流行，其中以1918年的流感流行最为严重，其死亡人数达到2000多万，而且死亡者多数为15-45岁青壮年。目前流感的威胁依然存在，2009年初甲型H1N1流感在南美洲被发现，目前已传播至全球五大洲。截止去年7月，我国内陆累计报告甲型H1N1流感确疹病例2003例，并有增长趋势。WHO早在1948年就已启动了流感计划，并已经在全世界83个国家建立了111个国家研究中心和4个协作中心，对流感病毒进行样品收集、检测和研究。尽管如此，科学家们仍然希望用5年时间投入4500万美元建立一个全球实验室来研究流感。由此可见，流感作为一种病毒性传染病不仅严重威胁着公众健康，而且给国家和社会带来了沉重的经济负担。 流感病毒属于正粘病毒科。可引起上呼吸感染的病毒有：1、流感甲、乙副流感1-3型。甲型流感全身症状较重，易发生抗原性变异而产生亚型变种，可引起世界性大流行。2、鼻病毒、冠状病毒所致感冒，其症状主要为低热，及上呼吸道卡他症状，称为普通感冒。3、腺病毒及合胞病毒，与流感病毒常发生于婴幼儿、儿童，且常发生毛细支气管炎和肺炎。4、柯萨奇病毒除有上呼吸道症状外，与流感病毒、腺病毒均易引起心肌炎。 西医对流感防治主要包括：1、对症处理：用镇痛退热药以减轻“卡他”症状，目前常用西药多为对乙酰氨基酚及马来酸苯那敏一类复方制剂。2、抗病毒药：目前，正式上市的抗流感药物大体分为两类：(1)以20世纪60年代中期发现的金刚烷胺为代表，只对甲型流感病毒有预防和治疗作用，属于离子通道阻断剂；(2)NA抑制剂，对甲型和乙型流感病毒均有效。另外，以流感病毒复制过程的不同环节为靶点，还有一些药物正处于实验室研究或临床试验阶段。3、疫苗是预防病毒的重要措施，近年来发展很快，如活疫苗、灭活疫苗、核酸疫苗等，但目前作用尚不理想，其原因是流感抗原不断发生变异，疫苗也就失败了。 中医认为感冒是感受外来风寒之邪所致，而且有普通感冒和流行感冒之分，早已认识到流感具有流行性。《伤寒论》有桂枝汤、麻黄汤、大青龙汤。《温病条辩》中桑菊饮，退热银翘散等治感冒的方剂应用至今。中医中药在防治流感方面积累了丰富经验，在退热、消除症状等方面均具有很好的疗效，而且无毒副作用。流感中成药在临床上被广泛采用，深受患者欢迎。但迄今为止用于防治流感的中成药的药理作用研究仍停留在抗炎、退热、镇痛，改善临床症状等方面，对抗上呼吸道病毒药理作用方面的研究尚不多，故开发一种既能改善症状又有抗上呼吸道病毒的新流感中成药很有必要。 我们研究的用于治疗感冒、流行性感冒及上呼吸道感染的中药复方制剂，其适应症为药功能辛凉解表，清热利咽，主治感冒风热表证及风温初起，经多年临床证明该药治疗上呼吸道感冒疗效显著，急性咽炎、扁桃体炎、气管炎等各种上呼吸道感染疗效均显著，并能缓解头昏头痛、鼻塞流涕、咽干、咽痛，退热效果快，与此同时，在90年代中期同济医院曾对该药进行多方面研究，发现该药在体外体内对流感病毒甲3型、柯萨奇病毒B4型及腺病毒7型均有显著抗病毒作用。用流感甲3型病毒致死量LD50的100倍接种小鼠，用药组可免除动物死亡。现我公司在一些中医老专家的指导下，结合现代制药技术对该药进行深入研究，进一步扩大毒谱试验，将其开发成具有广谱抗菌抗病毒作用的新药，相信此新药将会具有良好的临床运用前景。 发明内容： 我们公司开发出一种新的治疗感冒、流行性感冒及上呼吸道感染的中药复方制剂，该制剂的活性成分配方由重量百分比为10-15％金银花、15-20％葛根、10-15％黄芩、10-15％板蓝根、10-15％柴胡、10-15％连翘、8-12％贯仲、5-8％白芷、5-8％桔梗组成。 上述活性成份配方可以与一定比例的常用药用辅料相配，制成各种颗粒剂、片剂及胶囊剂等制剂。 本发明所要解决的另一技术问题是提供上述治疗感冒、流行性感冒及上呼吸道感染的中药复方制剂的制备方法。 本发明公开的治疗感冒、流行性感冒及上呼吸道感染的中药复方制剂的制备方法步骤如下： (1)活性成份挥发油及提取物的制备 将柴胡、黄芩、连翘粉碎成粗粉加水蒸煮提取挥发油，收集挥发油备用，滤过，水蒸液及药渣备用，葛根用90％乙醇回流提取2次，每次1.5小时，滤过，合并滤液及水蒸液备用，将葛根药渣及柴胡等药物药渣加水煎煮1.5小时，滤过，滤液与上述溶液合并，其余五味药材加6倍水煎煮2次，每次1.5小时，滤过，滤液与上述溶液合并，减压浓缩合并液至稀溶液，加3倍体积的75％乙醇溶液，搅拌，静置，滤过，滤液喷雾干燥，即得提取物。 (2)颗粒剂、片剂、胶囊剂的制备 取上述提取物，加入适当的药用辅料，加75％乙醇过12-20目筛制粒，干燥后，将挥发油与干颗粒混合，得半成品颗粒，直接分包装即得颗粒剂，将半成品颗粒与助流剂混合后压片即得片剂；将半成品颗粒与助流剂混合后装入空胶囊壳中即得胶囊剂。 本发明解决的再一个技术问题是提供本发明中药复方制剂在流行性感冒，优期是甲型流感、乙型流感方面的应用。本发明治疗感冒、流行性感冒及上呼吸道感染的中药复方制剂的治疗剂量为一日口服2-3次，每天总服用量相当于生药25-75g，3-5天为一个疗程。 本发明治疗的感冒、流行性感冒及上呼吸道感染的中药复方制剂是在湖北中医附院内儿科几位教授在中医传统辩证治理指导下，总结长期大量临床治疗外感风热、风温肺热等急性上呼吸道感染的经验基础上，参照柴葛解肌汤方(伤寒论)、银翘片方(温病条辩)组方原则，结合制代的制药技术，选葛根、金银花等9味中药组成复方制剂，我们对此药进行了药理药效、毒理学试验，结果如下： 药效学实验研究： 1、抗H1N1甲型流感病毒实验： A、活化病毒：甲型H1N1流感病毒种，经鸡胚尿囊腔和羊膜活化后，感染Vero细胞，加维持液rpmil60，3-4天后可见细胞变圆、肿大、融合和脱落等特异细胞病变出现，按常规方法测定病毒的感染滴TCID50。供本实验用病毒原液的柯萨厅病毒B4型毒和腺病毒7型种在Hela细胞中活化，所用维持液同前。病毒所致细胞变园、肿胀和形成葡萄串状，同上测定病毒感染滴度，供本实验用病毒原液。 B、细胞毒性测定：用RPMI1640将此中药原液作倍比稀释，在96孔已形成细胞单层的微孔内，加入不同稀释银葛液，37℃作用30分种后加入等量维持液，培养24、48和72小时观察药物对细胞的毒性，同时保留几孔未经药物处理的细胞作为正常对照组。 C、细胞培养中药物对病毒的抑制：将不同稀释浓度银葛液分别与等量已知滴度的病毒液配合，接种于已形成细胞单层的微孔内，35℃吸附1小时，吸去多余病毒-药物混合液，每孔加等量细胞维持液37℃培养，种毒后分别于2日、4日、6日记录培养孔的细胞变化。 D、结论：抗甲型H1N1病毒药效学试验结果表明，此中药复方制剂有明显抗甲型H1N1流感病毒作用。以20倍于成人用量的银葛制剂，可对致死剂量流感病毒(100TCID50)接种小鼠明显保护作用。 2、抗其它病毒实验： 综合体内、外抗病毒药效学试结果表明，此中药复方制剂有明显抗流感病毒(甲3型)、柯萨基(B4型)、腺病毒(7型)作用。以20倍于成人用量的银葛制剂，可对致死剂量流感病毒(100TCID50)接种小鼠明显保护作用；体外试验结果证明：此中药复方制剂可明显抑制大剂量(100TCI50)流感病毒(甲3型)、柯萨基(B4型)、腺病毒(7型)所致Hela或Velo细胞病变作用(CPE)。 3、抗细菌试验： (1)此中药复方制剂抗菌载体试验：用肺炎链球菌和乙型溶血性链球菌感染动物，氨苄青毒素胶囊作为对照阳性药物，结果肺炎链球菌感染未用药治疗的实验动物全部死亡，而此中药复方制剂治疗组存活率为50％，与氨苄青霉素治疗组疗效相同。用乙型溶血性链球菌感染未用药治疗组，全部死亡，银葛冲剂治疗组存活率在40％，疗效低于氨苄青霉素胶囊组。 (2)此中药复方制剂体外抗菌试验：对临床分离的106株呼吸道临床常见菌株均有较好作用，对革兰氏阳性球菌(金黄色葡萄球菌、A群链球菌、肺炎球菌)的MICS明显低于对革兰氏阳性杆菌(铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯氏菌)的MICS，同样对照组药物氨苄青霉素对革兰氏阳性球菌也有较好的抑菌作用。 4、此中药复方制剂的解热、镇痛和抗炎作用试验： (1)解热作用：对细菌毒素和蛋白胨所引起的感染性和非感染性发烧家兔与阿斯匹林热幅度均无明显差异，但银葛冲剂的解热作用特点为缓和而逐步降温。 (2)镇痛作用：对冰乙酸和热板所致化学性和物理性刺激的“疼痛”反应，此复方制剂能提高痛阈，有显著的镇痛效果，镇痛作用特点为逐步加强，持续时间长。 (3)抗炎作用：对大鼠蛋白血清性足跖和冰乙酸所致毛细血管通透性增高，银葛冲剂均有显著抑制作用，其抗炎效力银葛冲剂与阿斯匹林无明显差异。 5、此中药复方制剂对免疫功能的影响：此中药复方制剂能增强巨噬细胞吞噬功能和增强体液血清抗体水平，从而在稳定机制和抗感染中具有重要作用。 毒理实验： 1、急性毒性实验： 以临床用量50、100、200倍剂量给小鼠灌胃给药，连续观察七天，无一例死亡，未出现毒性反应，再以临床用药剂量306、383倍，容积为0.8ml最高耐药量试验，连续观察七天，无一例死亡，未出现毒性反应，处死动物病理检查各组动物脏器无异常。 2、长期毒性试验： 以临床用药量12.5、25、50倍大鼠灌胃组药，试验期为2月，结果显示，对大鼠行为、饮食、粪便等无影响，未发现毒性症状和副作用，对血液系统肝肾功能无不良影响。病理组织学检查未发现病理性变化。 具体实施方式： 实例1：活性成份挥发油及提取物的制备 配方：金银花300、葛根450、黄芩300g、板蓝根300g、柴胡300g、连翘300g、贯仲250g、白芷150g、桔梗150g 将柴胡、黄芩、连翘粉碎成粗粉加水蒸煮提取挥发油，收集挥发油备用，滤过，水蒸液及药渣备用，葛根用90％乙醇回流提取2次，每次1.5小时，滤过，合并滤液及水蒸液备用，将葛根药渣及柴胡等药物药渣加水煎煮1.5小时，滤过，滤液与上述溶液合并，其余五味药材加6倍水煎煮2次，每次1.5小时，滤过，滤液与上述溶液合并，减压浓缩合并液至稀溶液，加3倍体积的75％乙醇溶液，搅拌，静置，滤过，滤液喷雾干燥，即得提取物。 实例2：颗粒剂的制备 配方：金银花300、葛根450、黄芩300g、板蓝根300g、柴胡300g、连翘300g、贯仲250g、白芷150g、桔梗150g、甘露醇500-600g、乳糖200g、阿司帕坦3g 按实例1制成提取物和挥发油，将提取物与甘露醇、乳糖与阿司帕坦混合后，加75％乙醇过12目筛制成颗料，减压干燥后，喷入挥发油，每袋按10g分包装。使每袋含生药为25g。 实例3：片剂的制备 配方：金银花300、葛根450、黄芩300g、板蓝根300g、柴胡300g、连翘300g、贯仲250g、白芷150g、桔梗150g、淀粉70-130g、微晶纤维素50g、羧甲基淀粉钠20g、硬脂酸镁3g 按实例1制成提取物和挥发油，将提取物与淀粉、微晶纤维素混合后，加75％乙醇过20目筛制成颗料，减压干燥后，喷入挥发油，后加入崩解剂羧甲基淀粉钠与助流剂硬脂酸镁混合均匀后，压片，使片重为0.5g/片，含生药为3.125g。 实例4：胶囊剂的制备 配方：金银花300、葛根450、黄芩300g、板蓝根300g、柴胡300g、连翘300g、贯仲250g、白芷150g、桔梗150g、淀粉100g、乳糖100g、硬脂酸镁3g 按实例1制成提取物和挥发油，将提取物与淀粉、乳糖混合后，加75％乙醇过20目筛制成颗料，减压干燥后，喷入挥发油，后加入助流剂硬脂酸镁混合均匀后，装胶囊，使胶囊重为0.55g/粒，含生药为3.125g。 |
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