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近年来关于组蛋白的研究越来越多，组蛋白各种各样的修饰有各种各样的功能，想要做跟组蛋白相关的研究，组蛋白提取是一个必不可少的技能了。 你还在为组蛋白如何简单方便的提取而烦恼么，来，让学霸君教你一招。 组蛋白有四种类型：H2A、H2B、H3、H4，组蛋白是染色体基本结构蛋白，因富含碱性氨基酸 Arg 和 Lys 而呈碱性，可与酸性的 DNA 紧密结合。因为组蛋白是偏碱性的，因此我们可以使用酸法来提取。 下面学霸君就仔细介绍一下实验操作步骤啦： 1、将 3-5×105 个细胞种到 6 孔板中，接着进行自己需要的实验处理，处理结束后开始收蛋白，先用 1×PBS 将细胞洗两次，每次吸尽上清。 2、每孔加入 200ul NETN 裂解液，冰上裂解 15min
3、用细胞刮刮细胞，将细胞收集于 1.5mlEP 管中，1500g,4℃，离心10min 4、离心结束后可以在管底看到一小团接近透明的沉淀，小心吸尽上清，用 1ML NETN buffer 洗沉淀一次或两次，1500g,4℃，离心 10min 5、吸尽上清，小心吸，沉淀容易被吸走，加入 0.2M HCL 100ul （浓盐酸的浓度为 12M）冰水裂解 30min,(30min 后沉淀变成一个白色的小团块) 6、12000RPM，4℃，15min 离心，此时组蛋白已经溶解在上清中，将上清转移到新的 EP 管中，加入 20ul 的 1M Tris ph=8.0 中和酸性（5 倍体积的 HCL 加 1 倍体积的 1M Tris PH=8.0, 如 100ul 的上清中，可加入 20ul 的 1M Tris。 若中和不充分，则在下一步加入 SDS 的时候溶液会呈现黄色，可适量补加 1M Tris PH=8.0，只到溶液恢复蓝色）。 7、可用考马斯法测蛋白浓度 8、用 SDS 煮蛋白，100℃，10min.。接下来可进行 Western blot 实验。 9、跑胶时，上样量为 5ug 时比较适宜。可以根据自己的具体实验进行调整。 然后你就可以有这样的美美的结果啦！ |
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