罗阿丝虫的实验室诊断

开心100mm05xkw 2018-08-02

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电影《妖猫传》中，

杨贵妃饮下一杯有“蛊虫”的毒酒，

之后，“蛊虫”在她的皮肤里爬行嗜血，

十分恐怖！

而类似的情况，

竟然出现在了现实生活中。

近日，一种名为“罗阿丝虫病”在瑞金医院皮肤科被确诊。这种疾病在全国极为罕见，也是瑞金医院确诊的第一例“罗阿丝虫病”。

发现过程

患者杨某，男性，45岁，于2016年1月发现左上肢远端皮肤肿胀，伴皮肤颜色加深，遂于当地医院就诊，血常规结果示嗜酸性粒细胞升高，考虑患者曾于2015年5月至2015年11月期间在刚果金务工，且有疟疾史，遂进行寄生虫相关抗体检查。检查结果示“猪囊尾蚴循环抗体”及“日本裂体吸虫循环抗体”阳性，遂进行口服吡喹酮治疗。

服用吡喹酮1月后复查嗜酸性粒细胞并无明显降低，为排除血液系统疾病，行骨髓检查，结果示“骨髓象嗜酸性粒细胞增多，建议做过敏原、寄生虫及融合基因PDGFα等相关检查”。2016年8月左上肢MR检查结果显示“左前臂部分肌群及腕关节肌腱信号异常伴肌间隙少许积液，考虑炎性病变”，左前臂肌肉活检结果示“骨骼肌组织变性，肌束间纤维组织增生伴嗜酸性粒细胞浸润”，诊断患者“嗜酸性筋膜炎”，给予激素治疗。

激素治疗半月后皮疹好转，嗜酸性粒细胞计数下降，但随着激素的减量到2018年2月停药，患者嗜酸性粒细胞计数再次升高。为求进一步治疗，于2018年2月26日就诊于上海瑞金医院皮肤科。结合其特殊的个人史及嗜酸性粒细胞持续升高、皮肤颜色加深、肿胀等症状，首先考虑寄生虫感染可能性大，皮肤型黑热病待排。2018年3月2日上午进行骨髓穿刺涂片，送交检验科查找病原体。

经仔细的查找，没有发现利杜体，却在骨髓涂片中查见了一条微丝蚴（如图1），尚无法鉴定虫种。

图1. 骨髓涂片瑞氏染色，

高倍镜（40X）下观察到的微丝蚴

为了进一步鉴定虫种，且考虑到该微丝蚴在白天采集的骨髓片中查见，除了怀疑常见的班氏与马来微丝蚴以外，还应考虑在非洲地区也广泛流行且可以在白天外周血中查见的罗阿丝虫及盘尾丝虫等。因此与临床沟通后，分别在上午10时及夜间9时采集患者外周静脉血送至检验科查找微丝蚴。

对患者的外周血标本分别进行浓缩法处理，采用瑞氏染色，镜下查找微丝蚴。结果发现在晚间9时采集的外周血标本内未查见微丝蚴，而在上午10时采集的外周血标本中发现了微丝蚴（图2）。

图2. 浓缩法处理标本后涂片高倍镜（40X）下

观察到的微丝蚴

由于浓缩法需要离心浓集，导致白细胞与虫体粘连成团，利于发现虫体但无法进行微丝蚴形态学鉴别，于是制作厚薄血膜片并用吉姆萨染色进行虫体观察（图3）。

图3. 高倍镜下（40X）

吉姆萨染色观察到的微丝蚴

吉姆萨染色镜检结果发现虫体无法被染液染色，只能观察到折光性很强的透明虫体。于是再进行瑞氏染色，终于得到令人满意的染色效果（图4）。

图4. 瑞氏染色高倍镜（40X）下

观察到的微丝蚴

观察发现该微丝蚴体表包裹有鞘膜，头间隙短小，体核清晰可见，有尾核，结合该微丝蚴表现出的昼现性，高度怀疑为罗阿罗阿线虫（Loa Loa）。经与中国疾病控制预防控制中心寄生虫病预防控制所联系，将患者上午10时采集的外周血标本送检进行形态学及分子生物学检查，确诊为罗阿罗阿线虫感染。

罗阿罗阿线虫

罗阿罗阿线虫是一种以人类为唯一终宿主的寄生虫，成虫多寄生在人体各部位皮下、肌腱、筋膜等组织内，偶可寄生于内脏。微丝蚴具有日现周期性，中午前后会出现在外周血，其余时间停留在患者肺部。罗阿罗阿丝虫病主要流行区域分布在西非和中非的十一个国家（图5），斑虻是其唯一传播媒介。

图5. 截止至2010年12月，

WHO根据收集非洲11国4700多个村落的数据统计的眼部线虫流行地图（图片来源于WHO）

生活史

罗阿罗阿丝虫生活史较简单（图6），唯一传播媒介为斑虻，受感染的斑虻叮咬吸血时，会将发育至第三阶段的感染期幼虫通过伤口注入人类的皮肤感染人体①。幼虫发育成为丝虫成虫，通常定居于皮下组织②。雌虫一般较长，约40~70mm，宽约0.5mm。雄虫长约30~34mm，宽约0.35~0.43mm。成虫产下微丝蚴。微丝蚴具有鞘膜，长约250~300μm ，宽约6~8μm ，具有日现周期性。微丝蚴在脑脊液、痰液、尿液均可被查见。白天在外周血可查见微丝蚴，非循环活动期可在肺部查见微丝蚴③。斑虻在叮咬时摄取微丝蚴④。微丝蚴在斑虻的消化道内脱去鞘膜，通过血液移行并定居至胸部肌肉组织⑤。在此从第一阶段幼虫⑥逐步发育至第三阶段感染期幼虫⑦。第三阶段感染期幼虫移行至斑虻的口器⑧，然后在斑虻下一次叮咬人类时感染人体①。

图6. 罗阿罗阿线虫生活史

（图片来源于美国CDC）

致病

人被斑虻叮咬感染罗阿罗阿线虫以后通常在五个月甚至更久以后才会在外周血查见微丝蚴。微丝蚴能够在人体内存活最长达一年，如果不被虻叮咬摄取的话则他们会自然死亡。成虫在人体内寿命可长达17年，在此期间可不断地产下微丝蚴。

人感染罗阿罗阿线虫后通常症状轻微，主要症状为卡拉巴肿、眼部线虫病、荨麻疹、肌肉疼痛、关节痛和乏力等。卡拉巴肿是一种局限性无痛的肿块，通常发生在手臂和腿部的近关节处，可能会伴发局部或全身性的瘙痒。眼部线虫病则可在眼球表面发现蠕动的成虫。眼虫病症状有眼部充血，眼部瘙痒、疼痛以及对光敏感等。虽然眼虫病看上去很可怕（图7），但通常几个小时后成虫会自行离开眼部，一般也只会造成眼部的轻微损害。人感染罗阿丝虫以后，有时甚至能看见成虫在皮肤下移行，部分感染罗阿罗阿丝虫多年的患者会有一定的肾脏损伤症状。也有一些罕见的症状包括淋巴结肿痛、阴囊肿块、肺部局部炎症、肺部胸腔积液以及心肌瘢痕形成。