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NGS技术高速发展 测序仪器更新迭代的同时 作为很重要的一环 建库技术的发展同样至关重要 样本起始量要求过高 建库流程繁琐等 都会限制NGS技术的应用 科学家一直在不断探索 试图突破此类限制 转座酶（Transposase）的引入 就是建库技术很大的进步 不仅解决了上述问题 还开发了多个技术应用 拓展了NGS的适用范围 转座基因俗称跳跃基因 它的发现者美国遗传学家 芭芭拉.麦克林托克因此成为 1st独立获诺贝尔奖的女科学家 转座酶的发现不仅改变了 人们对基因组序列稳定性的认识 该系统开发成各种基因研究工具 反过来促进了遗传学理论的研究 转座子标签(transposon tagging) 是研究功能基因的有效工具技术 源于微生物的Tn5就是一个例子 随机性好、稳定性高、插入点易测 引爆了各巨头间极速建库的战争 今天继续安利国产Tn5建库方案 通过一步酶促反应实现DNA的 片段化、末端修复、接头连接 显著降低起始模板的投入量 并缩短了文库构建时间(1.5h) 转座酶和两种等摩尔接头 与模板DNA混合孵育后 通过PCR扩增加测序引物 再经片段大小分选和纯化 即得测序文库，结构如下 实验流程极简 但转座酶对底物DNA浓度敏感 必须具备合适的比例 抛开这点小麻烦外 转座酶建库还有更多彩头 辅助开发了很多技术 长片段读取、单细胞微量建库 ATAC-seq、mate pair建库等 更多内容可点击该链接 对ATAC建库感兴趣的同学 |
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