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Casitas B-lineage lymphoma（Cbl）-b是Cbl家族成员之一，属于环指型泛素连接酶。前期研究发现，黑素瘤组织及细胞中Cbl-b基因mRNA及蛋白表达均明显高于色素痣组织及正常黑素细胞，并且可促进黑素瘤细胞株A375增殖、侵袭及转移，但相关的分子基础及信号通路仍不明确。王小坡等采用非标记定量蛋白质组学技术，比较Cbl-b shRNA慢病毒载体沉默A375细胞株及阴性对照A375细胞株蛋白表达差异，并对差异蛋白进行基因本体富集及京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析，探讨Cbl-b参与黑素瘤发病的相关蛋白及可能机制。 shRNA介导黑素瘤A375细胞Cbl⁃b基因沉默前后蛋白质组学分析 王小坡 倪娜娜 熊竞舒 宋昊 姜祎群 陈浩 曾学思 孙建方 作者单位：中国医学科学院 北京协和医学院 皮肤病医院病理科 【引用本文】王小坡，倪娜娜，熊竞舒，等. shRNA介导黑素瘤A375细胞Cbl⁃b基因沉默前后蛋白质组学分析[J]．中华皮肤科杂志，2018, 51（8）: 569-574. doi：10.3760/cma.j.issn.0412-4030.2018.08.003. 【关键词】 黑素瘤； 泛素蛋白连接酶类； 原癌基因蛋白质cbl⁃b； RNA，小分子沉默； 蛋白质组学 使用非标记定量蛋白质组学技术鉴定分别用Cbl-b shRNA慢病毒载体（Cbl-b shRNA组）和对照慢病毒载体（对照组）转染的A375细胞的差异表达蛋白。采用生物信息学方法对筛选的差异蛋白进行基因本体富集及京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。Western 印迹验证差异蛋白（EphA2、GSK3β）表达和Cbl-b shRNA沉默后两组p-AKT表达。采用SPSS 23.0软件进行统计分析，两组间蛋白丰度比较采用两样本t检验。基因本体及KEGG富集分析结果采用Fisher精确概率法检验。 共鉴定3 449种蛋白，筛选出Cbl-b shRNA组和对照组差异表达蛋白74个。与对照组相比，Cbl-b shRNA组52个蛋白表达上调，22个下调。差异蛋白基因本体富集分析发现前5位显著富集生物学过程为整合素介导细胞黏附、单一生物代谢过程、整合素介导细胞黏附调节、蛋白质靶向线粒体调节、核酸代谢过程；前5位显著富集分子功能为DNA结合、2,2铁硫簇合物结合、信号受体活性、钙黏蛋白结合、细胞黏附分子结合；前5位显著富集的细胞组分为核小体、DNA包装复合体、光感器连接纤维、DNA-蛋白质复合体、胞外区部分。京都基因与基因组百科全书通路富集分析发现，前5位与黑素瘤相关的显著富集通路包括叶酸生物合成、轴突导向、细胞外基质受体相互作用、黏合连接、Wnt 信号通路。Western 印迹检测显示，Cbl-b shRNA组EphA2相对表达水平降低（0.369，以对照组表达水平为1计算），GSK3β表达增加（3.524），该结果与蛋白质组学检测结果一致；p-AKT相对表达水平降低（0.453）。 Cbl-b可能通过多种生物学通路参与黑素瘤发病；EphA2/PI3K/AKT信号通路可能是Cbl-b参与黑素瘤形成的重要机制之一。 |
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