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湛江等鞭金藻培养基和培养方法的优化
福建水产,2006年l2月第4期 J伽RNALOFFUJIANFIsHEIImS N0.4 Dec.25.2OO6 湛江等鞭金藻培养基和培养方法的优化 刘东超,谭金顺,蓝露萌,周银环 (广东海洋大学水产学院,广东湛江524025) 摘要:在室内采用正交试验的方法,对湛江等鞭金藻(1sochrysiszhanfiangensis)氮,磷,铁,碳,维生 索Bl,维生素B等主要营养成分进行了优化,获得了以天然海水为基础的优化培养基:NaNO,60mg/L, KH2P044mg/L,FeC6H5070.5mg/L,NaI-ICO,1.0g/L,维生素BI150v,g/L,维生素Bl2200ng/L.试验结果 表明,使用优化培养基培养湛江等鞭金藻具有生长速度快,产量高,成本低的优势.应用微生物流加技术 培养湛江等鞭金藻可取得较好效果. 关键词:湛江等鞭金藻;培养基;培养方法;优化;生物置 湛江等鞭金藻(1sochrysiszhanjiangensis)是 1977年从广东省湛江市南三岛分离获得,曾定 名为湛江叉鞭金藻(Dicrateriazhanfiangensis), 后经过系统的研究,确认它是等鞭金藻的一新 种,属于金藻门,普林藻纲,等鞭藻目,等鞭藻 科,等鞭金藻属,定名为湛江等鞭金藻….湛 江等鞭金藻具有个体小,无细胞壁,游动缓慢, 而且富含高度不饱和脂肪酸的特点u.2J,在水产 1/13页
经济动物苗种生产中被广泛应用,主要作为双壳 类幼体,虾蟹类的蚤状幼体,海参,方格星虫等 的优良饵料,可以极大的提高种苗的成活率和变 态率??引. 培养基中营养盐的浓度影响着微藻的生长 率,细胞的成分,叶绿素以及最后的产量J. 许多学者研究了培养基的成分对等鞭金藻生长率 等方面的影响l6们.目前,在等鞭金藻的培养 中已有各种各样的,提供不同营养盐浓度的培养 基[JJ.17].但是,有关湛江等鞭金藻的培养 基研究较少,采用流加培养技术培养湛江等鞭金 藻尚未见报道.本试验的目的是根据生产实际的 需要,通过对湛江等鞭金藻培养基的优化,选出 更优的培养基供生产使用,同时,对湛江等鞭金 藻的培养技术进行改进. l材料与方法 1.1藻种 试验用的湛江等鞭金藻(Isochrysiszhanjjian— gensis)藻种由广东海洋大学生物饵料实验室提供. 1.2药品 Na.NO3,KH2PO4,FeC6H507,NaHCO3和 H2NCONt~均是分析纯,VB.,VB.2是医用注射液. 1.3培养基 湛江等鞭金藻基础培养基(湛水107—13培 养液,以下简称I号培养基):NaNO,80mg, KH2PO48rag,FeC6H5O7(1%溶液)0.2ml,VB1 2001~g,VB12200rig,NaHCO30.5g,海水 1000mlllJ.欧俊新培养基(以下简称?号培养 基)CON2H440rag,NaNO335rag,KH2PO4 2/13页
5rag,FeC6H5O7(1%溶液)0.2ml,VB1100 g,VBl25lag,海水100Oral. 1.4海水和培养条件 海水取自湛江市南三岛,经过沉淀,300目 筛绢网过滤,再经脱脂棉过滤,煮沸消毒,静置 1天后使用,盐度为23.9.培养条件:正交试验 采用250ml三角瓶,盛培养液200ml,藻细胞起 始密度为38×10小/Tnl,验证试验和流加培养 试验分别在1000ml三角瓶中进行,其中,验证 试验盛培养液650ml,藻细胞起始密度为48.6× 10+/ml;流加培养试验盛培养液600ml,藻细 胞起始密度为80×10'小/Tnl.以上试验均在光 照培养箱(YCD一6OO型250D光照培养箱)中 进行,经ST一80C型照度计测得平均光照强度
78福建水产总第111期 为39IzE/m?s,光照周期L:D=12:12,温度为 28?,不通气培养,每天在8:00,12:00, l8:oo摇动培养瓶三次,每瓶摇3O秒,并随机调 换培养瓶的位置. 1.5湛江等鞭金藻培养基优化 在光照,温度等培养条件固定的情况下,以 天然海水为基础,针对NaNOKHPO? FeC6HsO1,NaHCO3,VBl,VBI2等主要因素设 计了五因素四水平的正交试验L(4)水平安 排,每组设三个平行组,试验结果取平均值,共 培养7天,见表l. 表1正交试验因素水平 Tab.1Factor~andleveloforthogonaltests 3/13页
因素 水平NaNO3KH2PO4FeC6O7NaHCO3VB1(p.g/L) (rag/L)(rag/L)(rag/L)(g/L)VBl2(ng/L) 3020.20.25150,2o0 6040.30.53o0oo 9O60.40.75450/6oo 12080.51600/8oo 1.6优化培养基的验证 用优化培养基与I号培养基和?号培养基在 1000ml的三角烧瓶中进行对照试验,每种培养 基设三个平行组,试验结果取平均值,共培养6 天. 1.7培养方法优化 在1000ml的三角烧瓶中进行了培养方法优 化试验,试验共设优化培养基的一次性培养,恒 速流加培养和变速流加培养三种培养方法.各种 培养方法均设三个平行组,试验结果取平均值. 一 次性培养的底液量为400ml,而流加组的底液 量为260ml,一共培养8天,恒速流加的流加速 度为20ml/d,变速流加可根据数学模型来控制 流加速率u引:F=dQ/dt=K(t—t.)(t—tb),其 中:F为流加速率(mL/d);t为培养时间(d); t.,.tb为流加开始和流加结束时的时间;K为流 加控制因子.当K值一定时,流加速率随时间 改变而改变.本试验从培养开始的第二天开始流 加,培养停止前两天停止流加,对上式积分可得 流加总量与流加控制因子的K值关系:Q=20K. K=7ml/d 4/13页
表2流加培养方案 Tab.2Theplanoffed-batchculture 1.8藻细胞密度的测定 用722型分光光度计(上海精密科学仪器有 限公司)在440nm处,测各试验浓度组的O.D. 值,用血球计数板(XB?K-25)在光镜下,计算藻细 胞数. l_9数据处理 生长率K=(InN.一InNo)/T.其中,式中N. 和N.一培养液单位水体积中细胞的数目,N.是 T时间开始的细胞数,N.是经过T时间后的细 胞数,T代表一段生长的时间;l(一生长率.试 验结果采用SPSS11.5软件进行方差分析. 2结果 2.1湛江等鞭金藻培养条件优化 经过7天的培养,对湛江等鞭金藻的生长率 K值进行直观分析和方差分析,结果如表3,表 4所示: 从表3,表4可以看到,根据直观分析中的 极差R值和正交分析结果,可看出影响因素的 主次顺序:NaHCO3>FeC6Hs07>KH2PO4> NaNO3>VBl/VB12.可见,NaHCO3对湛江等鞭 金藻的影响最大,维生素的影响最小.从表4的 方差分析可以得到,NaHCO3和FeCH,O,对湛 江等鞭金藻有极显着性的影响(P<0.O1).从 试验结果分析得出最适合湛江等鞭金藻生长的培 养基为:NaNO360mg/L,KH2PO44mg/L, FeC6H5O70.5mg/L,NaHCO31.Og/L,VBl 150~g/L,VBl2200ng/L. 5/13页 |
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