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最近在做加药物的细胞周期，做了好几次，出现如下图的流式拟合图，师姐们都说你这样的拟合是强行的拟合，s期不明显，需要重新做，可是做了好多次还是这样的结果。望专家教教我是哪里出错。做细胞周期的步骤是： 1. 先铺板，2E5/孔。过夜培养后加药（24h） 2. 再经过24h后可以进行测量。 3. 收集上清，并用PBS洗涤，再用胰酶消化，接着用PBS再洗一遍（在15ml管子中进行） 4. 1500转离心，小心去除上清，加入1ml的预冷PBS（记得要冲洗一下管壁），混匀后吸到1.5ml管中，再次在大厅中的离心机1500转4-5min（经过这样的一遍洗涤即可） 固定 5. 用枪吸走上清，剩余50ul左右，切勿吸走细胞，随后➕300ul预冷PBS（用左手拿着EP管小拇指抵住涡旋震荡仪，右手拿住吸有700ul的乙醇的枪）缓慢打入其中，（这个过程尽量要慢） 6. 置于-20°冰箱中20min（有的说1h），若是过夜要要置于4°（有的说4h以上） 7. 1500转离心3-5min，小心吸上清 8. 加入1ml预冷PBS，重悬 9. 1500转离心3-5min，吸取上清，轻弹 染色 10. 0.5ml/管的碘化丙锭染色液（PI）缓慢加入，并充分的混匀 11. 37°避光30min 先配好染色的溶液 12. 4°避光存放2h 13. 上流式仪 |
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