| 【摘要】：目的：增生性瘢痕是皮肤损伤后创面过度修复产生的一种常见疑难病症,从而其预防和治疗是创伤修复领域的重点研究内容。近年一些研究表明BTXA对增生性瘢痕具有一定的治疗作用,可以促进成纤维细胞的凋亡、减少胶原的合成。本课题通过建立兔耳腹侧增生性瘢痕模型,创面早期注射BTXA,动态观察BTXA对创面愈合、瘢痕形成以及对VEGF、COX-2、Bcl-2、Bax蛋白表达的影响,探索BTXA对早期HS的预防及治疗效果,进一步研究BTXA预防和治疗增生性瘢痕的作用机制,为瘢痕的防治提供理论依据以及扩展BTXA的应用前景。 方法：①选用健康新西兰大白兔16只,体量(2.5±0.2)kg,兔耳健全,雌雄不拘。于兔耳腹侧面近、中、远端各切取一个直径1cm2的全层皮肤缺损创面,间隔lcm,建立瘢痕模型。根据给药的不同分为实验组和对照组,设左耳为实验组即BTXA组(T组),右耳为对照组即生理盐水组(S组)。每组48个创面。另取8只兔子的耳腹侧面正常皮肤为空白组(B组)。②BTXA组每个创面给予皮下注射A型肉毒毒素0.12ml(3U),生理盐水组每个创面给予皮下注射生理盐水0.12ml,创面制作当日及术后15天各注射一次。③分别在术后3、7、11、15、18、30、60d收集标本,标本经HE染色后行组织学检查,光镜下计算切片的瘢痕增生指数及成纤维细胞数,并做统计学分析；用免疫组织化学方法比较增生块中VEGF、COX-2、Bcl-2和Bax蛋白表达的差异;免疫组化结果进行相关性分析。 结果： ①BTXA组可以降低兔耳瘢痕增生指数,同一时间BTXA组与生理盐水组相比差异有统计学意义(P0.05)： ②BTXA组可促进瘢痕愈合,BTXA组与生理盐水组上皮化时间相比,差异有统计学意义(P0.05)； ③术后15、30、60d在光镜下观察各组的HE染色切片可见：增生块中早期有大量成纤维细胞,晚期则以胶原为主；生理盐水组瘢痕组织真皮层明显增厚,成纤维细胞及肌成纤维细胞多,真皮中含大量排列致密、粗大的胶原纤维,排列混乱,呈旋涡状或结节状,形成胶原结节;BTXA组瘢痕组织真皮层较薄,成纤维细胞及肌成纤维细胞数量较少,胶原纤维致密下降,表层排列规则,呈水平向,漩涡状结构减少； ④术后30、60d光镜下计算免疫组化切片中VEGF、COX-2、Bcl-2和Bax蛋白表达的阳性细胞数,结果表明同一时间生理盐水组VEGF、COX-2和Bcl-2蛋白表达较多,BTXA组较少,差异有统计学意义(P0.05)。而同一时间生理盐水组Bax蛋白表达较少,BTXA组较多,差异有统计学意义(P0.05)。 ⑤相关性分析表明：COX-2与VEGF蛋白表达相关性分析表明二者呈正相关性,COX-2与Bcl-2蛋白表达的相关性分析表明二者无明显相关性。Bcl-2与Bax蛋白的相关性分析可以看出两蛋白的表达呈现负相关性。 结论： ①兔耳腹面的全层皮肤缺损愈合后,在一定时间内可以产生类似人类增生性瘢痕样病变。 ②兔耳瘢痕模型是一种简单、经济、重复性好的动物模型,可以用作动态研究药物对增生性瘢痕作用的实验动物模型。 ③BT想A可明显抑制兔耳创面增生性瘢痕的形成及瘢痕组织增生,同时可抑制增生性瘢痕的挛缩。 ④进一步证实BTXA抑制兔耳瘢痕增生和挛缩的效应可能是通过抑制(肌)成纤维细胞增殖以及抑制VEGF及COX-2的表达,减少胶原的合成来实现的。 ⑤BTXA抑制兔耳瘢痕增生可能是通过促进其凋亡减少胶原的合成来实现的。 ⑥BTXA抑制兔耳瘢痕增生可能是通过抑制Bcl-2蛋白的表达及促进Bax蛋白的表达而促进细胞凋亡。 |
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