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瘢痕是创伤愈合留下的痕迹，也是组织修复愈合的最终结果。但在某些个体，修复过程发生异常可以导致组织过度增生而形成增生性瘢痕（hypertrophic scar，HS），可能造成严重的畸形和其他不良的美容效果，给患者带来精神上的痛苦和经济上的负担。miRNAs参与调控细胞增殖、分化和凋亡。已有研究表明，miRNAs可以加重或抑制包括癌症和纤维化在内的各种疾病的发生和发展。例如，抑制黑色素瘤、胃癌、结肠癌、乳腺癌和肝癌的生长和转移。它还能抑制高糖诱导的炎症反应，以及心肌细胞的分化和心肌细胞外基质的积聚。目前尚无关于miR-495是否参与增生性瘢痕形成的报道。 今天分享的文章来自于中国人民解放军沈阳北方战区总医院整形外科，通讯作者是陶凯副教授，发表于《AGING》（doi：10.18632/aging.101965） 1.miRNAs在增生性瘢痕组织中的差异表达 与正常组织相比，miRNA基因芯片显示6例增生性瘢痕组织中miRNA表达下调(P<0.05)，6例miRNA表达上调(P<0.05)（图1A）。通过实时定量PCR，我们发现在差异表达的miRNAs中，miR-495也表现出这种变化(图1B)。miR-495在增生性瘢痕成纤维细胞中的表达明显低于正常瘢痕成纤维细胞和正常皮肤成纤维细胞(图1C)。 图1 miRNAs在增生性瘢痕组织中的差异表达 2. miR-495与FAK的关系 miRDB预测miR-495可与FAKmRNA特异性结合(图2A)。结果表明，FAK在增生性瘢痕组织中的表达高于正常组织(图2B)。实时定量PCR结果显示，瘢痕成纤维细胞FAK的表达高于正常皮肤成纤维细胞和正常瘢痕成纤维细胞(图2C)。 笔者还观察到miR-495水平与增生性瘢痕组织中FAK的表达呈负相关(图2D)。荧光素酶报告分析显示，FAK和miR-495共转染增生性瘢痕成纤维细胞（HSFs）后，FAK驱动的荧光素酶活性较对照组明显降低(P<0.05)。另一方面，当与miR-495和FAK MUT或FAK和miR-495共转染HSFs时，与对照组相比没有明显变化(图2E)。WB和RT-PCR显示，miR495下调FAK的表达，miR-495抑制剂上调FAK的表达(图2F-I)。 图2 miR-495与FAK的关系 3. MIR-495抑制HSFs生长 MTT结果表明，miR-495对HSF生长有明显的抑制作用，miR-495抑制剂则对HSF的生长有促进作用(图3A)。在 AV-PI检测中，Annexin V-Fluo-Resce显示miR-495的过度表达促进HSF凋亡，而miR-495抑制剂又具有相反的作用(图3B)。cyclin D1、bcl-2和bax是参与细胞周期调控和凋亡的重要蛋白，也参与了FAK通路。增生性瘢痕的形成与FAK通路密切相关。增生性瘢痕与编码细胞骨架运动介质的基因表达密切相关，COL1A，COL1A常在这些组织中高表达。然而，COL1A的表达并不是通过FAK信号通路来调节的。WB和实时定量PCR结果显示，miR-495能显著抑制FAK、FAKp-Tyr397、cyclinD1、bcl-2和COL1A的表达，而促进Bax的表达(图3C-F)。 图3 miR-495抑制HSF生长 4. FAK是miR-495抑制HSFs生长的关键 使用si-FAK沉默FAK表达可显著抑制HSF的生长(图5A-B)。然而，miR-495抑制剂的治疗抵消了抑制HSF增殖和促进其凋亡的作用,这些抑制作用是通过沉默FAK来实现的(图4A-B)。这可能反映了这样一个事实，即在同时用si-FAK和miR-495抑制剂处理的HSFs中，FAK水平明显高于仅用si-FAK处理的细胞，相关蛋白的表达也呈现出同样的趋势(图4C-D)。 图4 FAK是miR-495抑制HSFs生长的关键 5.miR-495在体内对FAK的抑制作用 体内伤口愈合的检查显示，与对照组相比，实验组有更小的伤口愈合。免疫组织化学分析显示miR-495在体内抑制FAK的表达(图5A)。WB和RT-PCR显示，在miR-495高表达的组织中，FAK、FAKp-Tyr397、cyclinD1、bcl-2和COL1A的表达受到抑制，而bax的表达受到促进(图5B-C)。 图5 MIR-495在体内对FAK有抑制作用 综上所述，本研究揭示了miR-495在增生性瘢痕形成中的重要作用，提示miR-495是治疗增生性瘢痕的潜在靶点。 |
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