qPCR，那些你不知道的不靠谱小秘密……

qPCR是不是很容易做？直接上样，然后上机就行了，根本不用动脑子，是不是？然而，qPCR的水深，估计不动脑子，你是不会知道的。在这篇关于qPCR测评的文献里，我们来看看qPCR到底有多不靠谱。

这是一篇简单的qPCR测评，测试了简单的两种qPCR试剂和qPCR仪，分别是A某和罗某。具体这两家公司要是觉得这帖子对他们不利，请他们自己去找这篇文献作者哈（这个锅我不背）。A某有一种qPCR仪，叫7X00，罗某的qPCR仪叫LC4X0（这里还分成了4X0FP和4X0SDM）。

首先作者是做了4个基因的检测，同样的模板，一样的反转录，用在不同的仪器上，所有仪器都对应他们自己厂里出产的qPCR试剂盒，和默认设置的程序。于是做出来的结果就是：

暖色调的是罗某的，冷色调的A某的产品，可以发现罗某的SYBR Green在他们自己的机子上做出来，值非常高。是不是很开心？傻孩子，是不是不知道ΔCT值越高扩增量越低啊？！ID-1这个基因在罗某的机器和试剂上甚至没扩出来。

但他们不信邪，觉得可能是默认设置不太好，所以他们降低了两台仪器升降温速率。可是罗某还是不争气。还是不死心的作者，用A某的试剂盒配套罗某的qPCR仪来实验，终于，ID-1扩增出来了。虽然做出来了，但是可以明显发现罗某的ΔCT值（或者说Cq值），还是要比A某的高出一大截。

（他们又调节了罗某的镁离子，也并没有什么卵用）

这个故事告诉我们，不同的仪器加上不同的试剂，做出来的qPCR效果可能就完全不一样。（当然，这是当年的数据，谁知道现在什么情况了呢）

要评价一个qPCR的好坏，首先是要确认各个试剂盒在同一台仪器上做出来的标准曲线的斜率，得到他们的扩增效率。

但是一般来说，谁会去在意这些细节呢？扩增效率计算后在0.9到1.1之间的，都算是基本符合的，而超过1.1或者小于0.9，基本上就是不合格的。理论扩增效率应该是1，但由于三次重复，以及稀释过程中的误差，可能会有0.9-1.1之间的摆动，但扩增效率太低，就说明这试剂盒不行了。

有人（Sonia Mirza，2010）也曾经做过多家公司SYBR Green试剂盒的比较：

测了S某、A某、B某和Q某的试剂盒，结果好像还是A某的试剂盒比较好一点，当然这些试剂品牌测试得比较片面。事实上，我其实更喜欢用T某的试剂盒，qPCR仪更喜欢国产的宏某（因为性价比特别高，而且他们仪器的软件可以魔改）。而我用到现在，B某的试剂盒真的也确实是不敢恭维，但不得不承认，B某的qPCR仪的软件真的是首屈一指的，远超A某。神奇的是，试剂不怎么样的B某，居然曾经出过一本qPCR试剂盒比较指南。有兴趣的，可以自己去找找，或者去星球上下载，星球的入口，我想大家应该也都知道了，对，“我真的不应该在评论区回复”。祝你们心明眼亮。