科研小白|实验入门第二讲——细胞培养

所需设备和容器

首先当然是我们操作的地方啦，细胞房中这个小小的工作台我们称它为超净台，可以保护样品在操作时避免污染。但也有的像病毒啊之类对人有威胁成分的更高级，可以保护人员为主，兼顾样品和环境，我们称它为生物安全柜。

▲超净台

▼生物安全柜

接下来就是细胞的“家”啦！各种size的细胞瓶、细胞皿，还有细胞培养板了。大家注意（细胞皿底部是要经过处理的哟，不然细胞无法贴壁，这你可要哭了哦 o(╥﹏╥)o）......

细胞

培养

相关知识

何为细胞培养

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细胞常规培养是在细胞房中进行，在超净工作台或生物安全柜中，把细胞处理好，根据需要加入细胞培养基，放入细胞培养瓶/皿或细胞培养板中，再放到带有5% CO₂ 的37℃恒温培养箱中培养。细胞就像花花草草，尤其是细胞株基本每天都要观察、打理的哦！

培养的细胞从哪里来

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1.细胞株

简单说就是买的或送的。

2.原代细胞

组织或血液中提取的。一般细胞株可以连续传代，而原代细胞养着养着就挂了。

培养细胞的生长方式有哪些

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1.贴壁生长

必须贴附于支持物表面才能生长。见于各种肿瘤细胞等。（你把培养皿或培养瓶底朝上，细胞也不会掉下来。

 2.悬浮生长

于悬浮状态下即可生长，不需要贴附于支持物表面。见于各种造血系统肿瘤细胞等。

PS：

每代贴附生长细胞的生长过程分为：

1）游离期：细胞接种后在培养液中呈悬浮状态，也称悬浮期 。

2）贴壁期：细胞贴附于（胶原、玻璃、塑料、其他细胞等）。

3）潜伏期：细胞有省长活动而无细胞分裂。

4）对数生长期：细胞数随时间变化成倍增长，活力最佳，最适合进行实验研究。

▲细胞贴壁期示意图

培养细胞需要怎样的生长条件

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1.细胞的营养需要

2.细胞的生存环境

温度：37℃

O_2：95%

CO₂：5%

PH：7.2-7.4

一定的渗透压

3. 无污染

4.无毒

细胞完全培养基的组成有哪些

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基础培养基：80-95%

血清：5-20%

碳酸氢钠：2.0g/L

青、链霉素：各200卑位/毫升

细胞

培养

细胞传代

Q1：何为细胞传代？

细胞在培养器皿中生长一定时间后，被分开接种到新的培养器皿即为细胞传代。

Q2:为什么要传代？

简单说就是“孩子”长大了，要“分家”！

细胞株在培养过程中数量会不断增多，但是培养细胞的细胞瓶/皿的空间有限，就会导致细胞之间接触过于紧密，会使得细胞增殖收到抑制，所以我们必须把其中一部分细胞转移到别的细胞瓶/皿，让细胞有足够的生长空间。

Q3:什么时候传代？

观察培养基是否正常，细胞状态如何，细胞密度如何，决定是否传代。如培养基变黄，细胞长成致密单层等情况。

Q4：传代方法有哪些？

1.悬浮生长细胞传代

1)离心法传代：离心1000转/分去上清，沉淀物加新培养液后再混匀传代。

2)直接传代法：悬浮细胞沉淀在瓶壁上，将上清培养液去除1/2~2/3，然后用吸管直接吹打形成细胞悬液再传代。

2.半悬浮生长细胞传代

此类细胞部分呈现贴壁生长现象，但是贴壁不牢，可用直接吹打使细胞从瓶壁上脱落下来，进行传代。

3.贴壁生长细胞传代

采用胰酶消化法传代。常用的消化液有0.25%的胰蛋白酶液。

细胞

培养

学姐的经验之谈

EXPERIENCE-1

靠技术“驯化”细胞

1） 严格无菌操作，多喷喷酒精，要是对灭菌的东西不放心，自己包自己送自己烘干。 
2） 不要和别人共用试剂耗材，自己准备一套。 
3） 有可能的话在拿到新细胞的时候做好支原体衣原体检测。 
4） 水浴锅很脏，生化培养箱要是得手动加湿的话，盘里的水也会很脏，勤换 (灭菌水加进去)。 
5）  晚上离开的时候最好给细胞房照紫外，超净台是用完就开紫外（记得照30min后关掉）。 
6） 最好的是同一时间就你一个人在用细胞房在养细胞。

EXPERIENCE-2

靠内心'感动'细胞

1） 自己的细胞自己养，血的教训。 
2） 在生物安全柜 (或者超净台)，枪头，血清管，血清，培养基，瓶子都足够好，并且细胞房有良好的卫生措施 (比如隔离服，手套，口罩，清洁，HEPA 等等) 且不违反操作原则的情况下，你其实很难污染。 
3） 上述条件不完备的情况下，就要多注意无菌操作了：比如要用的东西提前拿到台子里照啊 (不过这个其实也不大好，因为会挡住紫外线)，使用前 SDS+酒精擦台子，进出超净台一定要酒精擦手。 
4） 少对细胞说话，多靠内心来感动它们 (是的! 心不诚是不可以的!)

养细胞就像打仗，知彼知己，百战不殆！只有了解你养的对象，才能把它养好！

君君祝愿你们都可以把自己的细胞养得好好的哦！