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荧光定量PCR技术是普通PCR技术的改良和发展，它提高了普通PCR技术的特异性和准确性，能做到实时监控和准确定量，广泛应用于基础研究、临床检验、海关商贸检疫等各个领域。 1 1 灵敏度高，可以检测低拷贝的目的基因； 2 高精度，PCR扩增阶段包括3个阶段：指数增长期，线性增长期和平台期，96个重复指数增长期表现出高精度，而平台期则变化差异较大； 3 定量能力强，简单的流程就能得到高质量的定量数据； 4 动力学范围宽，可以精确定量9个数量级的差异； 5 速度快，节省时间和劳力，不需要电泳检测； 6 安全，使用荧光染料发光，不用EB或放射性物质，极大降低对实验人员健康的威胁； 服务内容 核酸提取和反转录 根据客户要求提取动物、植物、细胞和细菌等样品DNA或RNA 对所提RNA进行反转录以用于荧光定量PCR反应； 合成 设计合成各种引物并可根据客户要求负责引物的调试； 针对不同引物构建标准品用于绝对定量或相对定量实验； 设计合成各种标记探针并可根据客户要求负责探针的调试。 2 l mRNA表达检测 l MicroRNA表达和靶基因表达检测 l SNP检测 l 基因copy数检测 l 病原微生物样品检测 3 接受采用荧光定量PCR的检测方法针对各种检测目标的合作研发和委托研发。 检测方法 捷瑞提供两种PCR检测方法服务： SYBR Green I染料法 TaqMan/MGB探针法 1 游离状态下的SYBR Green分子发出微弱的荧光信号，当与dsDNA双螺旋小沟区域结合时，则发出绿色荧光，可在520nm波长下检测荧光信号，荧光信号的强度与dsDNA数量呈正相关。 SYBR Green Ⅰ染料法的特点： 高灵敏度，低背景信号，操作简单，不影响酶促反应，价格便宜。 2 TaqMan 荧光探针是一种寡核苷酸探针，荧光基团连接在探针的5`末端，一般用FAM、VIC、HEX、Cy3、Cy5等荧光基团，而淬灭剂则在3`末端，一般为TAMRA、BHQ1、BHQ2等，其中TAMRA发出黄色荧光，BHQ1和BHQ2不发出荧光。PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5'-3'外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。 TaqMan-MGB探针与普通TaqMan荧光探针相比具有更短的序列和更高的序列特异性，常被用于SNP分型的研究中，有望成为基因诊断和个体化用药分析的首选技术平台。 探针法的特点： 与染料法相比具有更低的背景信号，更高的灵敏度，可以检测低于10个分子的模板，更高的特异性，结果也更准确。同时也具有染料法的操作简单，不影响酶促反应等优点。 |
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